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【求助】求小鼠睾丸支持细胞分离经验
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这个帖子发布于4年零187天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位前辈，我现在要分离小鼠睾丸支持细胞进行培养，但是做了三次都没有贴壁，不知道问题出在哪，**指导！！！我的步骤：1、16－22天小鼠颈椎脱臼法处死后，75%酒精浸泡30秒消毒，睾丸取出后置预冷PBS，40分钟（路上所需时间）后开始处理。2、剔除白膜，剪碎睾丸。0.25%胰酶（含edta）1.5ml/个睾丸37°C消化30-50分钟，等体积DMEM/F12含10%FBS终止消化，1000r/MIN离心5分钟，弃上液。3、加0.1%胶原酶消化30分钟，过200目网筛，1000r/MIN离心5分钟，弃上液。4、DMEM/F12含10%FBS 5ml重悬后转如培养瓶，入孵育箱37°C 5%CO2培养。请教各位，我到底是哪里有问题，是胰酶消化的时间长了吗？
不知道邀请谁？试试他们
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今天培养48小时，终于看到贴壁的了，只不过数量少，也算是有点欣慰了。
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我也打算做支持细胞、、用买的细胞株做怎样、、会不会对实验结果有影响 、、、求大虾指点啊、、
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我是自己分的呢，买的就不需要鉴定了，后续实验有待跟进
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