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求助下面PPT内容出自哪一篇文献~谢谢。
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Kan应该还没有发表吧不过关于bone loss的文献,以前看Dentsply的人发过一个,具体的得...
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你好 ,文章找到了吗
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文章还没找到,估计还没发表吧。
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求助文献,谢谢
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EUS-guided intrahepatic portosystemic shunt with d...
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[求助]请问UNG酶和dUTP dTTP之间有什么关系啊?我看文献遇到的!谢谢!
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这个帖子发布于11年零202天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我要做real time !现在需要买UNG酶!不知道哪一家比较好啊!谢谢!
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尿嘧啶糖苷酶(UNG)法由于UV照射的去污染作用对500bp以下的片段效果不好,而临床用于检测的PCR扩增片段通常为300bp左右,因此UNG的预防作用日益受到重视和肯定。1. 原理:在PCR产物或引物中用dU 代替dT。这种dU化的PCR产物与UNG一起孵育,因UDG可裂解尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架间的N-糖基键,可除去dU而阻止TaqDNA聚合酶的延伸,从而失去被再扩增的能力。UNG对不含dU的模板无任何影响。UNG可从单或双链DNA中消除尿嘧啶,而对RNA中的尿嘧啶和单一尿嘧啶分子则无任何作用。2. dUTP法:用dUTP代替dTTP,使产物中掺入大量dU。在再次进行PCR扩增前,用UNG处理PCR混合液即可消除PCR产物的残留污染。由于UNG在PCR循环中的变性一步便可被灭活,因此不会影响含dU的新的PCR产物。3. dU引物法:合成引物时以dU 代dT,这样PCR产物中仅5ˊ端带dU。UNG处理后,引物失去了结合位点而不能扩增。对长片段(1-2kb以上)的扩增用dUTP法效率较用dTTP低,而用dU法就可克服这一缺点。dU引物最好将dU设计在3ˊ端或近ˊ端。该法仅能用于引物以外试剂的处理。4. 优点:可以去除任何来源的污染;UNG处理可以和PCR扩增在同一个反应管内进行;由于扩增产物中有大量dU存在,可彻底消除污染源。5. 需注意的是掺入dUTP的DNA不应对产物的任何操作有影响,在进行PCR产物克隆时,应该转化UNG-(UNG缺陷)大肠杆菌受体菌,否则转化产物会被受体菌UNG消化掉。
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非常感谢 !
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楼上战友说的很清楚了 我在加两句PCR 防止污染要注意许多细节其中“遗留污染”是最常见和比较严重的一种,园内已经 有很多资料
可以先查查。尿嘧啶糖苷酶(UNG)法就是消除“遗留污染”污染的常用的方法,简单说,即使环境被上次PCR的产物污染了,在反应体系中加入尿嘧啶糖苷酶(UNG)(楼上说了原理)也可以不影响这次实验,就是这样!!!
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请问哪一家的UNG比较好啊!我想买啊!谢谢
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实惠一些得可以买Takara的
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呵呵,的确性价比比较高的就是TAKARA的,便宜又好用,不过当让没ABI的好用。一般试剂盒都会有含UNG酶不含UNG酶两种供选择啊,没有UNG酶的也会另外配UNG的。你用的是QIAGEN的试剂盒的话可以问问QIAGEN有没有UNG。
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呵呵,的确性价比比较高的就是TAKARA的,便宜又好用,不过当让没ABI的好用。一般试剂盒都会有含UNG酶不含UNG酶两种供选择啊,没有UNG酶的也会另外配UNG的。你用的是QIAGEN的试剂盒的话可以问问QIAGEN有没有UNG。
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