&& 查看话题
跪求大家来看我的融合细胞。我已经无能为力了
我做的是单抗，骨髓瘤sp2/0细胞与小鼠脾细胞融合后，3天后的照片，rpmi培养基＋HAT＋类胎牛血清（胎牛血清没货了），上面感觉漂浮着一些絮状物，又像是污染，我现在不知道要咋办了，已经好几次了！
这些都是同一张图片在不同倍数显微镜下的图片。跪求大神指点，万分感谢！！！！
100514.jpg
100517.jpg
100522.jpg
100628.jpg
100630.jpg
污染了。培养基中加双抗吧。另外，杂交瘤细胞难养，血清质量至关重要，一定要胎牛血清，我们一直用gibco的，还不错。 血清中加入支原体清除试剂，可以杀灭支原体污染，同时还具有广谱抗菌作用。不同于抗生素，对细胞没有任何毒害和依赖性，因为试剂本身为多肽，可以降解。可以试一下。
支原体是一种大小仅为0.2~0.3 μm，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22-0.45 μm）的原核生物，在细胞培养过程中，支原体感染发生率达到63%，因而细胞培养过程中被支原体污染是一个世界性的难题。多篇文献研究表明：当细胞（特别是传代细胞）被支原体污染后，细胞内的DNA、RNA及蛋白表达发生改变，而细胞的生长率一般并未发生显著的影响，因而细胞被支原体污染一般难以察觉。
& & 吉锐生物根据自身的经验开发了MycoplasmaOUT™，用于解决因支原体污染而导致细胞污染或状态下降的问题，同时其对于见的革兰氏阴性和阳性菌也有一定的清除作用。从而确保研究人员的研究结果真实、可信。
MycoplasmaOUTTM Treatment
1、& & & & 推荐稀释比例为1:1000，比如：10ul的Treatment加入到10ml的培养基中。
2、& & & & 弃去旧的培养基，用PBS将细胞清洗干净，再加入新鲜的含有Treatment的培养基，1天1次，连续处理3天。这一点非常重要，因为Treatment在培养基中会被缓慢降解。另外，也可以2天1次，连续处理5-6天。
3、& & & & 如果发现细胞对Treatment非常敏感，或者很明显的抑制细胞生长，建议1:2000稀释，1天1次，连续处理6天。如果细胞污染严重，推荐再适当延长处理时间。
4、& & & & 用Treatment处理时，建议保持细胞的密度在50-60%之间。
5、& & & & 处理完毕后，加入新鲜的培养基，或者MycoplasmaOUTTM Prevention预防支原体再次污染。
MycoplasmaOUT™ Prevention
1、& & & & 推荐稀释比例为1:1000，比如：10ul的Prevention加入到10ml的培养基中，用于预防支原体污染。
2、& & & & 建议根据细胞的周期不一样，每2-4天处理1次，长期处理，以预防支原体污染。 污染了，建议加双抗，如果没效果，丢掉重新免疫，重新融合吧。 : Originally posted by 逍潇 at
污染了。培养基中加双抗吧。另外，杂交瘤细胞难养，血清质量至关重要，一定要胎牛血清，我们一直用gibco的，还不错。 加双抗的浓度是多少呢？？大概加多少？ : Originally posted by 逍潇 at
污染了。培养基中加双抗吧。另外，杂交瘤细胞难养，血清质量至关重要，一定要胎牛血清，我们一直用gibco的，还不错。 请问这是什么污染呢？ : Originally posted by yipan at
血清中加入支原体清除试剂，可以杀灭支原体污染，同时还具有广谱抗菌作用。不同于抗生素，对细胞没有任何毒害和依赖性，因为试剂本身为多肽，可以降解。可以试一下。
支原体是一种大小仅为0.2~0.3 μm，无细胞壁， ... 这是支原体污染吗？？？ : Originally posted by helincai at
请问这是什么污染呢？... 应该是细菌污染。加双抗吧，我以前做融合也污染过，加了双抗就好了。不仅是最后的HAT培养基里加，一开始用来洗骨髓瘤细胞和脾细胞的培养基里都要加双抗。可以买gibco配好的双抗，每100mL培养基加1mL。买回来的双抗记得1mL/管分装，不要反复冻融。 : Originally posted by 逍潇 at
应该是细菌污染。加双抗吧，我以前做融合也污染过，加了双抗就好了。不仅是最后的HAT培养基里加，一开始用来洗骨髓瘤细胞和脾细胞的培养基里都要加双抗。可以买gibco配好的双抗，每100mL培养基加1mL。买回来的双抗 ... 嗯嗯，好说的很有道理，真的好感谢你！！！万分谢意！！！ 我看不清楚细胞，有些脏东西很正常，我做杂交瘤的时候也这样，主要是一些脾脏碾磨下的一些小碎渣之类的，你培养一段时间看看，如果增多直接丢弃或者这个污染的孔加NaOH处理。
细菌污染不是这样子，是一些小小的黑色点点以比较快的速度在培养基里打转或者到处跑，你的不像。要算污染可能是霉菌，如果污染霉菌，整个培养基会非常浑浊，培养基里面看到絮状的东西，霉菌的话有菌丝，污染直接全部丢弃，否则整个培养箱全毁，因为有孢子飘。但是我感觉你的没问题，你的黑色的东西大，感觉是“实”的，应该是一些实质的组织之类的。当然存在一些你忽略的真正的细菌或者霉菌也难说。
至于支原体污染，这个实在没办法，我的sp2/0复苏之后肯定要过老鼠腹腔，至少一遍，过两三次之后会清除支原体，然后取出来再培养，状态会非常好，非常适合做融合。融合时最好加双抗，血清要好的最好了，但是也影响不大，我们用的是小牛血清（融合培养是20%），融合细胞需要滋养细胞。 : Originally posted by helincai at
这是支原体污染吗？？？... 支原体清除试剂不仅可以杀灭支原体，同时还具有广谱抗菌作用。不同于抗生素，对细胞没有任何毒害和依赖性，因为试剂本身为多肽，可以降解。有兴趣可以联系：QQ： 这个不是污染了，这是sp2/0在HAT里死掉的碎片，没有融合的细胞 弱弱的问几句
1，你确定不是污染吧?
2，有人说SP2/0，脾细胞等的死细胞碎片。我想问，你不做单克隆吗？怎么做的呀？流式细胞吗？我们以前是96孔板有限稀释（蛮累的）
3，你融合前，制得的脾细胞不过滤吗？大的片块过滤掉。
你当时融合后没看吗？啥样子，没这些东西吗 : Originally posted by liupeng0215 at
弱弱的问几句
1，你确定不是污染吧?
2，有人说SP2/0，脾细胞等的死细胞碎片。我想问，你不做单克隆吗？怎么做的呀？流式细胞吗？我们以前是96孔板有限稀释（蛮累的）
3，你融合前，制得的脾细胞不过滤吗？大的片 ... 这个当时因为做到很晚了，加上比较急，被人一直催，所以做完直接就放培养箱培养了。三天后去看，发现就这样了。脾细胞用那种一次性的过滤器过滤后的，=。至于做单克隆肯定是用96孔板啊！ : Originally posted by 采妮830 at
这个不是污染了，这是sp2/0在HAT里死掉的碎片，没有融合的细胞 确定吗？？那这样该怎么处理？？？ : Originally posted by yipan at
支原体清除试剂不仅可以杀灭支原体，同时还具有广谱抗菌作用。不同于抗生素，对细胞没有任何毒害和依赖性，因为试剂本身为多肽，可以降解。有兴趣可以联系：QQ：... 你确定？？？？如果只是卖试剂而没解决问题，那不是得不偿失？ : Originally posted by 生物小通 at
我看不清楚细胞，有些脏东西很正常，我做杂交瘤的时候也这样，主要是一些脾脏碾磨下的一些小碎渣之类的，你培养一段时间看看，如果增多直接丢弃或者这个污染的孔加NaOH处理。
细菌污染不是这样子，是一些小小的黑色 ... 哇！！大神啊！！你的回复太精辟了！！！这个就是感觉是实体的东西。但是覆盖了好多孔板底部，感觉就是不好的。sp2/0细胞之前是有注射过小鼠腹腔的，是非常适合坐融合的细胞。我待会去看看细胞的样子。谢谢你呀！！！！你真的很厉害！！ : Originally posted by helincai at
你确定？？？？如果只是卖试剂而没解决问题，那不是得不偿失？... 解决问题是肯定会的。 : Originally posted by helincai at
确定吗？？那这样该怎么处理？？？... 都没有融合的细胞了，就算不是这样也要重做了啊，有融合的细胞的话把它传出来 从培养基的颜色和状态看，应该是细菌污染了，培养基中都要加双抗。另外是不是取脾脏的时候碰到小鼠的皮毛了？正常三天后孔里很干净，只能看见一小点杂交瘤。}