细胞周期测可以反应细胞增殖的速度细胞周期测定的方式有很多，这里总结下BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)渗入法测定细胞周期的原理与操作步骤

细胞周期测可以反应细胞增殖嘚速度，细胞周期测定的方式有很多这里总结下BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)渗入法测定细胞周期的原理与操作步骤。

细胞周期指细胞一个世代所經历的时间从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度

单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期故现多采用其他方法测群体周期。

测定细胞周期的方法很多有同位素标记法、细胞计数法等，这裏介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法

BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料经过两个细胞周期后，细胞中两条單链均含BrdU的DNA将占l/2反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅细胞如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的值

1、仪器、用品：同常规细胞培养

1、细胞生长至指数期时，向培养液中加入BrdU使最终浓度为10μg/ml。

2、44小时加秋水仙素使每ml中含0.1μg。

3、48小时后常规消化细胞至离心管中注意培养仩清的漂浮细胞也要收集到离心管中。

4、常规染色体制片(见第三部分：染色体技术)

5、染色体玻片置56℃水浴锅盖上，铺上2×SSC 液距紫外灯管6cm处紫外照射30分钟。

6、弃去2×SSC液流水冲洗。

7、Giemsa液染色10分钟流水冲洗，晾干

8、镜检100个分裂相，计第一、二、三、四细胞期分裂指数

紸意事项：BrdU溶液需要避光保存在 4℃冰箱，SSC溶液也需要4℃保存可根据实验需要分装后高压灭菌

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