SO?4）砷形态的分析方法。采用微波消解法和超声溶剂提取法对我国不同海域9种鱼和贝类海产品进行前处理，对砷含量及其化学形态进行分析。实验表明，鱼和贝海产品主要砷形态为砷甜菜碱AsB，其含量占可提取砷的?42.8%～99.4%?，大多数贝类样品含有砷糖PO?4、砷糖OH，其含量分别占可提取砷的32.5%～57.1%和?1.4%～3.3%?，少数样品含有DMA，其含量分别占可提取砷的5.7%～25.0%, 所有样品无机砷的浓度均低于可提取砷的2.0%。在鱼和贝类海产品中，含砷化合物主要是毒性较低的有机砷，不会对人的健康带来危害。
　　关键词 高效液相色谱?电感耦合等离子体质谱； 砷； 形态分析； 鱼和贝类海产品?
　　海洋生物中砷化物含量较高，是人体摄入砷的重要来源??[1]?。研究表明，砷的毒性与其存在的形态密切相关。以砷化物的半致死剂量LD??50?计，其毒性依次为H?3As＞As? ＞As? ＞一甲基砷酸（MMA）＞二甲基砷酸（DMA）＞三甲基砷氧化物（TMAO）＞砷糖＞砷胆碱（AsC）＞砷甜菜碱（AsB），可见无机砷的毒性最大，而有机砷的毒性较小，而AsC和AsB被认为是无毒的??[2]?。因而传统的元素总浓度的测定已经不能满足评估砷的暴露或摄入对人体健康的影响，砷的毒性研究应该从砷的形态入手，区分海产品无机砷和有机砷化物，特别在砷的循环与转化过程中起重要作用的砷糖??[3]?，以及无毒的砷胆碱和砷甜菜碱对于评价海产品安全性非常重要。?
　　砷的形态分析主要采用液相色谱分离与电感耦合等离子体质谱（ICP?MS）??[2]?、电感耦合等离子体发射光谱（ICP?AES）、原子荧光光谱（AFS）??[4]?、原子吸收光谱（AAS）等联用技术??[5]?。ICP?MS具有灵敏度高、检出限低等优点，已成为砷形态分析中最具前景的联用方法之一??[6]?。Larsen等??[7]?采用阴阳离子交换色谱成功分离8种不同形态砷的化合物，但不能分离4种砷糖； Madesn等??[8]?采用阴离子交换色谱分离4种形态砷的标准化合物和Fucus抽取物，并采用LC?ESMS（电喷雾质谱）确定四种砷糖结构，但As?与一种砷糖保留时间相同。本实验采用阴离子交换色谱（Hamilton PRP?X100柱）和阳离子交换色谱（Dionex Ionpac CS?10柱）与ICP?MS联用技术，建立了9种不同形态砷的化合物的分析方法，对我国不同海域?9种鱼（黄鱼、带鱼、三文鱼、鳕鱼?）和贝（螃蟹、虾、牡蛎、蛏子、蚌）海产品中砷含量及其化学形态进行分析检测。在所有分析样品萃取物中AsB为砷的主要形态，无机砷的浓度低于总砷的2%。
　　2.1 仪器与试剂?
　　?SymbolmA@ L进样管（Rheodyne, Cotata， CA，美国）；Ionpac CS10 阳离子交换柱（美国?Dionex公司?）； PRP?X100阴离子交换柱（美国Hamilton公司）；XYJ80?1?型离心机（上海精密仪器仪表有限公司），MDS?2002A微波消解仪（上海新仪微波化学科技有限公司）。?
Testing Programme）； Kelp粉末（Brirkbeck College, University，UK）; 砷糖PO?4和砷糖OH（作者从天然物质中分离），鱼和贝样品（超市购买），所用试剂均为分析纯。水为18 MΩ超纯水。不同形态的砷的化学结构见文献[8]。?
　　2.2 实验方法?
　　2.2.1 样品的萃取与硝化 取适量鱼和贝类肌肉组织用粉碎机粉碎，称取5.000 g于聚四氟乙烯管中，加入10 mL甲醇?水（1∶1，V/V），超声20 min后离心10 min，吸取萃取液于50 mL烧杯中，重复萃取?4次?，合并萃取液，在电热板上30 ℃蒸干，以10 mL去离子水溶解，保存在4 ℃冰箱中，用于分析砷形态。?
　　称取1.0000 g的鱼和贝类海产品肌肉组织于聚四氟乙烯（Teflon）离心管中，加入3 mL HNO?3和?1 mL? H?2O?2，拧松离心管帽于750 W微波消解3～4 min。再重复两次，每次间隔冷却10 min，清澈的样品液以去离子水定容10 mL，用于总砷检测??[10]?。?
　　2.2.2 总砷的测定 以9 mL 1% HNO?3稀释1 mL被硝化的样品，ICP?MS测定萃取前后鱼和贝类海产品中的总砷，??187?Re为内标，以砷的标准曲线进行定量。?
　　以标准参考物质BCR?CRM 627（比利时标准参考物质及计量学会提供）考察方法的准确度，标准参考值为（4.8±0.3） mg/kg As，方法测定值为5.0±0.3 mg/kg As。在标准参考物质中分别加入2 ng/L的?As??, As?, MMA和DMA，平行3次测得平均回收率分别为96%, 101%, 95%和100%。?
　　在pH 2.0的酸性流动相系统中，DMA、砷糖PO?4和砷糖OH将被质子化，形成As??＋??OH结构??[13]?。同是质子化的阳离子结构，砷糖OH保留时间最长，而砷糖PO?4保留时间最短。这是因为在砷糖PO?4中的磷酸部分含有一个易解离的氢原子，随着氢原子的解离，砷糖PO?4将可能变成阴离子结构，使得其具有两性离子特征， As??＋??OH中正电荷发生弱化，致使砷糖PO?4保留时间最短。?
　　所有被分析样品均检出AsB，结果见表3。AsB在一种螃蟹中浓度最高（6.60 mg/kg，湿重），其次是黄鱼（1.73 mg/kg，湿重），而在其它样品中的分布相对较为均匀。在鱼类样品（除三文鱼外）中，AsB的含量高于可提取砷的96.0%。AsB是稳定性较好的化合物，其在人体中不能代谢，直接被排除体外，不会危害人体健康??[14]?。而贝类样品则含有多种砷的化合物。在双壳类（牡蛎、蛏子和蚌）样品中，砷糖PO?4含量较高，为可提取砷的13.8%～57.1%，而AsB为可提取砷的42.8%～82.6%，远低于鱼类样品。砷糖OH在所有双壳类样品中被检测，其含量为可提取砷的1.4%～3.3%。?

　　尽管砷糖没有细胞毒性和诱变性，但当人摄入砷糖含量较高的海产品后，砷糖被代谢为DMA，而DMA的毒性高于砷糖??[15]?。DMA仅在三文鱼、虾和牡蛎样品中被检出，其含量分别为可提取砷的25.0%, 7.4%和1.4%。在1个蛏子样品中，发现了一个未知砷的化合物（见图4），其含量为其可提取砷的6.5%。但在其它样品中均未检出。?