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用过期的DNS测定还原糖会对结果产生什么影响
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DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。
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DNS 试剂的避光保存时间好像不超过半年吧，放置一周让显色剂稳定后，时间越长效果越差。
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DNS法测定木糖含量时最佳测定波长的选择
【摘要】：为了正确地选择DNS法测定木糖含量时的最佳测定波长,扫描了木糖与DNS试剂反应液的紫外-可见吸收光谱(400～700nm),并分析测定了其在480、500、520、540、550、560nm时的OD值。结果表明:木糖与DNS试剂反应液的最大吸收波长在480～490在480nm波长下测定时,灵敏度最高,且于150～600μg/ml范围内呈现较好的线性关系,其回归系数r值=0.99997,回收率大于99.6%。在500、520、540、550、560nm测定时,灵敏度依次降低。因此,DNS法测定木糖时的最佳测定波长为480nm。
【作者单位】：
【分类号】：TS207
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关于糖的定量方法,至今已不止几十种,恐怕发表的已有几百种,还常有新的方法发表。也许...通常可用于糖定量的氧化剂有碘、铜试剂、铁试剂和硝基化合物。1.用碘定量糖（Willst&#228；tter-Schudel法）醛糖能被碱性碘液定量地氧
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本文报告了两种萤光试剂的制备方法并用一种萤光试剂标记了四种核苷二醛和四种5'-次甲基核苷二醛。萤光试剂Ⅰ,1-二甲氨基萘-5-磺酰-甘氨酰肼(DNS-Dly-NHNH_2)的制备
目的:研究DNS比色法测定N-AcGA含量的实验条件,为实际应用中测量N-AcGA的含量提供简便快捷的方法。方法:在DNS实验的基础上,对测定N-AcGA含量的实验反应条件(试剂
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测定多糖的方法
测定多糖的方法:蒽酮—硫酸法,苯酚—硫酸法,比色定量法,纸色谱法,离子交换色谱法,酶法,原子吸收法,HPLC法,DNS(还原法),磷钼比色法。
一、苯酚—硫酸法
1、原理:糖在浓硫酸作用下脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合
物。在10~100mg范围内其颜色与糖的含量成正比。在485nm波长下有最大吸收峰,故可用比色法在波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖和多糖的测定方法。简单,灵敏度高,实验室基本不受蛋白住存在的干扰。
2、实验药品
浓硫酸苯酚
3苯酚溶液的配制
(1)先配制80%苯酚溶液,然后称取80.0g苯酚加20.0g水,使之溶解,置于冰箱中,
避光长期保存。取80%苯酚37.5mL定容到500Ml.配制成60%的苯酚溶液,避光保存。
(2)取苯酚100g,加铝片0.1g和碳酸氢钠0.05g,蒸馏收集182℃馏分。称取7.5g加
水150mL溶解,置棕色瓶内放冰箱备用。
二、蒽酮—硫酸显色法
1、实验药品
2、溶液的配制
称取蒽酮0.2g,加浓硫酸100mL混均即可(现用现配)
三、高效液相色谱法
多糖溶液进行高效液相色谱,利用TSK—GEL G4000PW柱.RI—10A示差折光检测器,以双蒸馏水为流动相,溶液浓度为0.5mg/Ml,进样量50μL,根据峰形判断样品的纯度。
为排除还原性单糖的干扰,可采用DNS(3,5—二硝基水杨酸)比色法测定还原糖的含量。
1、原理在碱性溶液中3,5—二硝基水杨酸与还原性糖共热后被还原成棕红色氨基化合物,
在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系。再将通过硫酸—苯酚,或者蒽酮—硫酸法得到的总糖结果减去还原糖,即得较准确的多糖含量。
五、地衣酚—硫酸法
溶液的配制
称取400mg地衣酚(3,5—二羟基甲苯)溶于155mL浓盐酸中,另加45mL含0.33%三氯化铁的0.01mol·mL_1盐酸,临用前配制。
苯酚—硫酸法和蒽酮—硫酸法的缺陷:首先葡萄糖是单糖而植物多糖的组成是多样的,只是用葡萄糖作为参照不确切,其次,显色试剂的不专属单糖的干扰严重,实际上测得的结果是总糖的结果。3 3。5一二硝基水杨酸法(简称DNS法)
DNS法测定原理基于在一定的范围内,还原糖的含量和反应液颜色成比例关系,利用比色法可测定多糖的含量。对没有还原性的多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行定。还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其他产物,3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3一氨基一5一硝基水杨酸。在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系,利用分光光度计,在540nm波长下测定吸光度值,查对标准曲线并计算,便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时,每断裂一个糖苷键需加入一分子水,所以在计算多糖含量时应乘以0.9。DNS比色法中,色素等还原性物质可与DNS显色剂显色,采用水解前测定值校正水解后测定值的方法简便、有效地排除了色素等杂质的干扰。DNS法测多糖含量具有操作简便、快速、灵敏度高、杂质干扰较小等优点。
4萨氏(Somogyi—Nelson)法
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多糖检测方法_化学_自然科学_专业资料。多糖的检测方法关于多糖含量测定,业内有两种评价方法。 一种是狭义上严格的多糖测定,即水提取多糖后,以凝胶色谱柱分离、洗脱...测定多糖的方法 - 测定多糖的方法:蒽酮—硫酸法,苯酚—硫酸法,比色定量法, 纸色谱法, 离子交换色谱法, 酶法,原子吸收法,HPLC 法,DNS(还原法) ,磷钼比色法...5 文章编号 :
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