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MAVS通过VDAC1诱导细胞凋亡的分子机制与研究.pdf 47页
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硕士学位论文
MAVS通过VDAC1诱导细胞凋亡的分子机制研究
姓名：管楷
申请学位级别：硕士
专业：细胞生物学
指导教师：钟辉
MAVS(mitochondriaanti-viral
signalingprotein)是一种在先天免疫途径中发
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挥重要作用的蛋白。它定位在线粒体外膜上，由N端的CARD(caspase
domain)结构域和C端
domain)．1ike结构域，中间的脯氨酸富积(proline-rich
头蛋白，募集下游的TBKl和IⅪ＆，从而磷酸化转录因子IRF．3和IRF一7。磷酸
化的IRF．3和IRF．7同源二聚化后进入细胞核，启动I型干扰素基因的表达。
MAVS也能通过激活IKKo．／p／T复合体来活化转录因子NF．’①。活化的NF．心从
细胞质转移到细胞核，启动多种炎症因子前体基因的表达，帮助细胞对抗病毒感
染。最新的研究结果显示，MAVS可能参与细胞凋亡信号通路。首先，MAVS
在细胞凋亡时发生依赖于蛋白酶体和c弱pase的切割。其次，MAVS可以通过干
次，仙台病毒SeV感染细胞所造成的凋亡效果会因为MAVS的干扰下调而降低。
登革热病毒DEN会通过切割MAVS抑制细胞的凋亡作用。然而，MAVS在凋亡
中的具体功能仍然不清楚。
channel)也是定位在线粒
与MAVS一样，VDAC(voltage-dependent
体外膜上的蛋白，它是一种电压依赖的阴离子通道。哺乳动物VDAC有三种同
同工型，所以它是人们主要的研究对象。已知VDACl的功能是参与线粒体能量
代谢，与ATP／ADP在线粒体与胞质之间的运输有关。同时，VDACI也能形成
孔道，允许线粒体中的细胞色素C通过，进入胞质中，是线粒体凋亡信号通路
的关键组分。本研究发现MAVS有可能通过VDACI参与细胞凋亡信号通路。
1．MAVS能够诱导细胞凋亡：首先通过MTT实验和AnnexinV-FITC／PI染
色的流式细胞术检测证实MAVS具有诱导细胞凋亡的功能，且具有一定的剂量
依赖性。通过细胞周期阻滞实验，发现MAVS具有延缓细胞周期进程的功能。
2．MAVS通过与VDACI相互作用诱导细胞凋亡：构建了VDACl小干扰
RNA质粒，并将其转染进入细胞干扰下调细胞内源的VDACI，发现VDACl的
干扰下调对MAVS诱导的细胞凋亡具有抑制作用；构建了各种标签的VDACI
融合蛋白表达质粒，通过免疫共沉淀的实验，发现MAVS与VDACl在细胞内可
MAVS通过VDACi诱导细胞凋亡的分子机制研究
以形成复合物；通过免疫沉淀的实验，发现MAVS与VDACl具有细胞内源性的
生理情况下的相互作用；通过Far
N端a螺旋结构域
具有直接的相互作用；MAVS的脯氨酸富积结构域和VDACl
是它们相互作用的结构域。
3．MAVS通过上调VDACl的蛋白水平影响其介导的细胞凋亡：通过在细
胞中过表达MAVS，发现细胞内源的VDACl的蛋白水平会因此而上升；在MAVS
缺陷的细胞系中，内源的VDACl蛋白表达水平下降。
综上所述，本研究发现MAVS通过与VDACl直接相互作用，增强VDACl
蛋白的稳定性，上调VDACl蛋白的表达水平
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