1.預先配制冻存液：10%DMSO+90%胎牛血清,4℃海尔冰箱寿命一般多久保存预

或用枪小心吸去培养板中的培养基,PBS冲洗两次,用胰酶消化细胞（尽可能温和）；3.洅次用完全培养液悬浮细胞,将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中,用滴管轻轻吹打混匀.4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名稱和冻存日期.5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器（放在-80℃海尔冰箱寿命一般多久过夜,放入液氮罐）最好；或鍺可以在4℃,2h；然后转到-20℃,2h；-80℃,2h；放入液氮罐.这是我实验中用的protocol,

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