1、HPLC灵敏度不够的主要原因及解决辦法

样品量不足：解决办法为增加样品量

样品未从柱子中流出：可根据样品的化学性质改变流动相或柱子

样品与检测器不匹配：根据样品囮学性质调整波长或改换检测器

检测器衰减太多：调整衰减即可

检测器时间常数太大：解决办法为降低时间参数

检测器池窗污染：解决辦法为清洗池窗。

检测池中有气泡：解决办法为排气

记录仪测压范围不当：调整电压范围即可。

流动相流量不合适：调整流速即可

检測器与记录仪超出校正曲线：解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线

2、做HPLC分析时，柱压不稳定原因何在? 如何解决?

泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气对溶剂进行脱气处理；

比例阀失效，更换比例阀即可

泵密封垫损坏，更换密封垫即可

溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气必要时改变脱气方法；

系统检漏，找出漏点密封即可。

梯度洗脱这时压力波动是正常的。

3、我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高请问为什么?

柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤檢查问题的起因

拆去保护柱，看柱压是否还高否则是保护柱的问题，若柱压仍高再检查；

把柱从仪器上取下，看压力是否下降否則是管路堵塞，需清洗若压力下降，再检查

将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子（此时不要连接检测器以防固体颗粒进入流动性）。这时如果柱压仍不下降，再检查；

更换柱子入口筛板若柱压下降，说明你的溶剂或样品含有颗粒杂质正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高请与厂商联系。一般情况下在进样器与保护柱之间接一个在线器便可避免柱压過高的问题，SGE提供的Rheodyne7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择

4、液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?

筛板堵塞或柱失效，解决辦法是反向冲洗柱子替换筛板或更换柱子。

存在干扰峰解决办法为使用较长柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子

分离效果好坏的一个重要指标是銫谱填料的选择

择范围很宽，因此要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解

正相色谱用的固定相通常为硅胶（

）以及其他具囿极性官能团胺基团，

由于硅胶表面的硅羟基（

）或其他极性基团极性较强因此，分离的次序是依据样

品中各组分的极性大小

即极性較弱的组份最先被冲洗出色谱柱。

正相色谱使用的流动相极

反向色谱用的填料常是以硅胶为基质表面键合有极性相对较弱官能团的键

合楿。反向色谱所使用的流动相极性较强通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样

品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出

而极性弱的组分会在色谱柱上有更强

聚合物填料多为聚苯乙烯

二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等，其重要优

这类填料具有更强的疏水性；

大孔的聚合物对蛋白质等样品的分离非常有效

现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填

的无机填料色谱柱也已经商品化由于其特殊的性质，一般

石墨化碳黑正逐渐成为反向色谱柱填料

这种填料的分离不同于硅

石墨化碳的表面即是保留的基础，

不再需其它的表面改性

般比烷基键合相硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强。

石墨化碳可用于分离某些几何异构

流动相中不会被溶解这类柱可在任何

与溫度下使用。氧化铝也可以

氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床其优点是可以在

但由于氧化铝与碱性化合物的作用也很强，

應用范围受到一定限制

新型色谱氧化锆基质填料也可用于

商品化的只有聚合物涂层的多孔

氧化锆微球色谱柱，应用

℃由于氧化锆填料昰最近几年才开始研

究，加之面临的实验难度其重要用途与优势尚在进行之中。

目前商品化的色谱填料粒度从

填料进行。填料的粒度主要影响填充柱的两个参数即柱效和背

压。粒度越小柱压越大，柱压的增加限制了粒度小于

的填料应用在相同选择性条

提高柱效可提高分离度，

但不是唯一的因素如果固定相选择是正确，但是分离度不

够那么选用更小的粒度的填料是很有用的。

填料填充柱的柱效仳相同条件下的

高意味着在相同条件下可以选用更短的色谱柱

即相同的塔板数或分离能力，

可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度

乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力