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生姜收获机械设计
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3秒自动关闭窗口口蹄疫O、A、Asia-1型三价灭活疫苗专利查询/专利号/专利人/发明人查询
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口蹄疫O、A、Asia-1型三价灭活疫苗
公开(公告)号
公开(公告)日
申请(专利)号
O、A、Asia-1型三价灭活疫苗
A61K39/295(2006.01)I
A61K39/295(2006.01)I;A61K39/135(2006.01)I;A61P31/14(2006.01)I
分案原申请号
申请(专利权)人
中国农业科学院兰州兽医研究所
发明(设计)人
王永录;张永光;方玉珍;蒋守田;刘力宽;潘
730046甘肃省兰州市城关区徐家坪1号
进入国家日期
专利代理机构
甘肃省专利服务中心
一种口蹄疫O、A、Asia-1型三价灭活疫苗，由O型口蹄疫病毒抗原、A型口蹄疫病毒抗原、Asia-1型口蹄疫病毒抗原和佐剂按下述配比制成：
疫苗配制的比例为，抗原∶佐剂＝1∶1；
其中抗原按下述重量百分含量配制：
45％的已灭活并经3倍浓缩的O型病毒抗原O/china/99、20％的A型病毒抗原AF/72和35％的Asia-1型病毒抗原Asia-1/XJ/KLAMY/04混合而成；
佐剂：采用蒙太得206佐剂――Montanide ISA 206佐剂；
上述原料按照下述工艺方法和顺序制备而成：
a.1、O型毒种：牛源O型口蹄疫病毒O/china/99株细胞毒；
a.2、A型毒种：牛源A型口蹄疫病毒AF/72株细胞毒；
a.3、Asia-1型毒种：牛源Asia-1型口蹄疫病毒Asia-1/XJ/KLAMY/04株细胞毒；
b、制苗材料的制备
制苗材料为BHK-21单层细胞，细胞的培养按一般组织培养方法进行；
c、病毒的增殖
用15L转瓶BHK-21细胞通过浓缩培养法分别增殖制苗用O、A、Asia-1型病毒抗原，转瓶机转速为10～12r/h，收获病毒液，在-15℃下冻结保存；
d、病毒灭活的程序，包括：
d.1过滤；将冻结的0、A、Asia-1型制苗病毒液分别融化，经60～80目铜纱网过滤除细胞碎片，用7.5％NaHCO3调PH至7.6～7.8，并加200u/mL的、200μg/mL的；
d.2灭活；向已过滤的O、A、Asia-1型病毒液中分别加入BEI二乙烯亚胺使其浓度达到2mmol/L，在37℃温室或发酵罐夹套水浴循环升温至30℃，并在30℃下持续灭活26h，其间每4h摇振1次，灭活终止期加入过滤除菌的50％硫代溶液，使其终含量为2％，置2～8℃冷库或发酵罐冰盐水保温待检；
d.3安检；对O、A、Asia-1型灭活病毒液分别进行安检，用每型灭活病毒液，颈背部皮下注射2～3日龄乳鼠，0.2mL/只，设对照乳鼠，观察7d，全部乳鼠不出现口蹄疫症状和发病死亡，方为灭活彻底；
对O、A、Asia-1型灭活病毒液分别按《中国兽药典》进行无菌检验；
e.浓缩将O型、A型、Asia-1型制苗病毒液分别物理浓缩3倍；
f、疫苗配制
疫苗乳化，先将油佐剂相真空负压进料到乳化机内，搅拌过程中，将灭活的病毒液按比例真空负压进料到油佐剂相中，循环搅拌至抗原与佐剂充分混合后，通过均质机乳化成略带粘滞性的双相油乳剂疫苗；
g、疫苗检验，包括：
g.1、物理性状检查；该疫苗为矿物油乳剂型，外观呈白色或淡粉红色略带粘滞性流体。取一清洁吸管，吸取少许疫苗滴于清洁冷水表面，呈云雾状扩散；吸取疫苗10mL，加入离心管中，以3000r/min离心15分钟，水相析出应不超过0.5mL；用1mL吸管(出口内径1.2mm)吸取25±1℃的疫苗1mL，令其垂直自然流出0.4mL，所需时间应小于或等于8s；
g.2、无菌检验；
g.3、安全检验
g.3.1用体重350～450g的豚鼠2只，每只皮下注射疫苗2mL；用体重18～22g的小鼠5只，每只皮下注射疫苗0.5mL，连续观察7日，均不应出现因注射疫苗引起的死亡或明显的局部反应或全身反应；
g.3.2用至少6月龄的健康易感牛3头，每头舌背面皮内注射20个点，每点0.1mL疫苗，逐日观察至少4d，之后，每头牛肌肉注射疫苗9mL，继续逐日观察6d，均不出现口蹄疫症状或明显的因注射疫苗引起的毒性反应；
g.4、效力检验：用至少6月龄的健康易感牛45头，分为3组，每组15头。将待检疫苗分为1头份、1/3头份、1/9头份3个剂量组，每一剂量组分别于颈部肌肉注射15头牛，接种21d后，将各剂量组免疫牛随机等分为O型、A型、Asia-1型三个攻毒组，连同对照牛各2头，分别进行攻毒；O型攻毒组，每头牛舌上表面两侧分两点皮内注射牛口蹄疫O型病毒强毒，每点0.1mL，共0.2mL，含104ID50；A型攻毒组，每头牛舌上表面两侧分两点皮内注射牛口蹄疫A型病毒强毒，每点0.1mL，共0.2mL，含104ID50；Asia-1型攻毒组，每头牛舌上表面两侧分两点皮内注射牛口蹄疫Asia-1型病毒强毒，每点0.1mL，共0.2mL，含104ID50；连续观察10d；对照少3蹄出现水泡或溃疡，免疫牛仅在舌面出现水泡或溃疡，而其它部位无病变时判为保护，除舌面以外任一部位出现典型口蹄疫水泡或溃疡时判为不保护；根据免疫牛的保护数，按Karber法计算被检疫苗的PD50，每头份疫苗对0型、A型、Asia-1型口蹄疫的免疫效力应至少分别达到3PD50。
一种口蹄疫O、A、Asia-1型三价灭活疫苗，由O型口蹄疫病毒抗原、A型口蹄疫病毒抗原、Asia-1型口蹄疫病毒抗原和佐剂按抗原∶佐剂＝1∶1比例，其中抗原配比：45％的已灭活并经3倍浓缩的O型病毒抗原O/china/99、20％的A型病毒抗原AF/72和35％的Asia-1型病毒抗原Asia-1/XJ/KLAMY/04混合而成；经：毒种、制苗材料的制备、病毒的增殖、病毒灭活的程序、菌检、浓缩、疫苗配制和疫苗检验步骤制备而成。本发明一次接种可同时预防O、A、Asia-1型三个血清型的口蹄疫，具有现用疫苗无法达到的便捷性和实用性，可降低用于防疫的人力、物力和财力，具有广阔的应用前景。
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