为什么CDC提出应将大肠埃希菌严重吗O157:H7列为常规检测项目?

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埃希菌属概述|微​生​物​各​论
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CDC将大肠埃希氏菌O157:H7列为常规检测项目 EHEC的血清型50种,最具代表性的是O157:H7.在北美许多地区,O157:H7占肠道分离病原菌的第二或第三位,是从血便中分离到的最常见的病原菌医学.全在.线.提供.,分离率占血便的40%,6、7、8三个月O157:H7感染的发...
1)形态与染色:本菌的形态与脑膜炎奈瑟菌很相似。在脓汁标本中,此菌通常位于中性粒细胞内,而在慢性淋病时常位于细胞外。从患者体内新分离的菌株可有荚膜和菌毛,经人工培养后,呈卵圆形或球形,排列不规则。无芽胞和鞭毛。 (2)培养特性:营养要求较高,须...
布氏姜片吸虫:寄生在人体小肠,引起姜片虫...
梅毒的病原体为苍白螺旋体,是小而纤细的螺旋状微生物,一般染色不着色,通常须用暗视野显微镜观察。其繁殖周期较长,为30h-33h左右。 【临床表现,梅毒症状】 (1)2周-4周(l天-90天前有不洁性接触史。 (2)主要损害为局限性糜烂或溃疡,常为单发,但多发的也...
①原生生物:此类寄生生物很广泛,常见的有疟疾原虫(Plasmodium sp.)、蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)等。 ②无脊椎动物:此类寄生虫从数量和种类上都是最多的,甚至许多门的无脊椎动物是专性营寄生的医学全.在.线.提供. 。常见的如营内寄生...
1.糖类的分解:细菌分泌胞外酶,将菌体外的多糖分解成单糖(葡萄糖)后再吸收。各种细菌将多糖分解为单糖,进而转化为丙酮酸,这一过程是一致的。丙酮酸的利用,需氧菌和厌氧菌则不相同。需氧菌将丙酮酸经三羧酸循环彻底分解成CO2和水。厌氧菌则发酵丙酮酸,产...
寄生虫及其产物对宿主均为异物,能引起一系列反应,也就是宿主的防御功能,它的主要表现就是免疫。宿主对寄生虫的免疫表现为免疫系统识别和清除寄生虫的反应,其中有些是防御性反应。例如宿主的胃酸可杀灭某些进入胃内的寄生虫。有的反应表现为将组织内的虫...
螨虫的显微镜检测法就是从鼻子或比较油性的部位取一点油脂分泌,放在显微镜下观察,因为显微镜观察直观科学,但是也有一定的局限性,可能单次检测是看不到螨虫,要多次重复检测。 螨虫是一种寄生虫不是细菌,所以要求检测的操作人员使用显微镜时,物镜10倍、...
幽门螺杆菌是1983年澳大利亚学者罗宾。沃伦(J.Robin,Warren)和巴里马歇尔(Barry,Marshall)从一个慢性活动性胃炎患者胃粘膜活检标本中首先分离到的。它是一种呈S形或弧形弯曲的革兰阴性杆菌,菌体一端的鞭毛可以使细菌方便地穿过胃粘膜而定居至胃上皮细胞,...
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①原生生物:此类寄生生物很广泛,常见的有疟疾原虫(Plasmodium sp.)、蓝氏贾第鞭毛虫...大肠杆菌O157:H7 -
肠出血性(EHEC)是能引起人的出血性腹泻和肠炎的一群大肠埃希氏菌。以O157:H7血清型为代表菌株。
大肠杆菌O157:H7 -
生物学特征
1、EHEC&O157:H7属于肠杆菌科埃希氏菌属。革兰氏染色阴性,无芽胞,有,动力试验呈阳性。其鞭毛抗原可丢失,动力试验阴性。。 2、EHEC&O157:H7具有较强的,pH2.5-3.0,37℃可耐受5小时; 3、耐低温,能在冰箱内长期生存;在自然界的水中可存活数周至数月; 4、不耐热,75℃&1分钟即被灭活;对氯敏感,被1mg/L的余氯浓度杀灭。 5、EHEC&的最适生长温度为33-42℃,37℃繁殖迅速,44-45℃生长不良,45.5℃停止生长。 6、EHEC&O157:H7除不发酵或迟缓发酵山梨醇外,其他常见的生化特征与大肠埃希氏菌&基本相似,但也有某些生化反应不完全一致,具有鉴别意义。EHEC&O157:H7虽然有uidA基因,但其编码的β-葡萄糖醛酸酶无活性,不能分解4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷(MUG)产生荧光,即MUG阴性。 7、EHEC除其代表菌株O157:H7外,还包括O157:NM、O26:H11、O111:H8、O125:NM、O121:H19、O45:H2、O4:NM、O145:NM、O5:NM、O91:H21、O103:H2、O113:H2等血清型的部分菌株。血清学鉴定包括O抗原和的鉴定。前者可使用玻片凝集试验或胶乳凝集试验;后者则应先进行动力试验,动力活泼者再进行玻片和试管凝集试验。 8、EHEC&O157:H7的另一个显著特征是可产生大量的Vero素(VT),也称作类志贺氏毒素(SLT),是EHEC的主要致病因子。Vero毒素按免疫原性等方面的不同可分为VT1和VT2。该毒素有一个A亚单位和5~6个B亚单位组成。B亚单位与宿主肠壁细胞糖脂受体结合,具有毒素活性的A亚单位进入细胞,改变60s核糖体的组分,的合成。编码VT的基因位于噬菌体上,可缺失而不产生VT。
大肠杆菌O157:H7 -
流行概况E.coli&O157:H7引起的出血性结肠炎是1982年在俄勒岗州和密执安州,因食用汉堡包引起的食物中毒的病人粪便中被分离并命名的。据美国疾病控制中心(CDC)报告,每年全国约发现2万多例病人。死亡人数200-500人,以后陆续在全球五大州20多个国家被发现或引起暴发和流行。自82年发现至今,发生规模最大的一次爆发是97年5&月下旬,日本冈山、广岛等县几十所中学和幼儿园相继发生6起集体食物中毒事件,人数多达1600人,导致3名儿童死亡,住院儿童达80人。同时日本仙台和鹿儿岛形成中毒人数过万人,死亡11人,波及44个都府县的爆中毒,引起全世界的关注。此外美国、加拿大、瑞典、澳大利亚、苏格兰、威尔士等国家和地区也相继报道了的散发性感染和暴发流行。 我国1988年首次分离到。从已有的流行病学调查资料看,我国也存在散发病例,还没有爆发流行的报道。近几年也通过监测,先后从牛、猪、羊、粪便,肉类等食品中查到E.coli&O157:H7。
日,德国明斯特大学医院26日宣布,该院卫生研究所经调查确认,近日在德国暴发的肠出血性大肠杆菌(EHEC)疫情是由一种名为“Husec 41”的肠出血性大肠杆菌变种引起。这一少见的变种对很多抗生素具有抗药性。与此同时,德国汉堡卫生研究所已查明这种病菌的一个来源是产自西班牙的黄瓜。 流行特点1.季节性:多发生于夏秋两季6-9月为发病高峰。11月至次年2&月极少发病。 2.地区分布:多发生于发达国家,主要以散发性为主。 3.易感人群:儿童5-9岁、老人50-59岁明显高于其它年龄组,最小3个月,最大85岁。 4.宿主:农场动物牛、羊、猪、鸡、马、鹿、鸽子、海鸥等均可能为 O157的携带者。 5.食源性E.coli&O157:H7感染:牛肉、生奶、鸡肉及其制品,蔬菜、水果及制品等均可引起污染,其中牛肉是最主要的传播载体。&
大肠杆菌O157:H7 -
致病因素E.coli&O157:H7的另一个显著特征是可产生大量的Vero(VT),也称作类志贺氏毒素(SLT),是EHEC的主要致病因子。Vero毒素按免疫原性等方面的不同可分为VT1和VT2。该毒素有一个A亚单位和5~6个B亚单位组成。B亚单位与宿主肠壁细胞糖脂受体结合,具有毒素活性的A亚单位进入细胞,改变60s核糖体的组分,干扰蛋白质的合成。编码VT的基因位于噬菌体上,可缺失而不产生VT。 所致疾病(1)&轻度腹泻 (2)&出血性结肠炎(HC) (3)&溶血性尿毒综合症(HUS) (4)&血栓性血小板减少性紫癜(TTP) E.coli&O157:H7的感染剂量极低。伏期为3-10天,病程2-9天。通常是突然发生剧烈腹痛和水样腹泻,数天后出现出血性腹泻,可发热或不发热。部分患者可发展为HUS、TTP等,&严重者可导致死亡。
大肠杆菌O157:H7 -
E.coli O157:H7的检验
(一)&国标法(常规法) 1、 2、分离 3、鉴定 (二)&金标试纸法 该方法是中华人民共和国卫生部频布的“关于全国肠出血性O157:H7感染性腹泻应急处理预案”中的指定方法。
将样品经过特殊的前增菌及增菌后,取120ul的增菌培养液放入试纸夹的样品槽中,样品由于毛细管作用移至反应区,反应区中含有特殊的抗体(E.coli&O157:H7)它与胶体金颗粒共轭偶联。如果样品中存在抗原,将同金标抗体结合形成抗原-抗体复合物,沿着硝酸纤维素膜向前移动至含有固定的抗E.coli&O157:H7抗体区域(T区),金标免疫的复合物与该区域的抗抗体发生特异性结合形成一条可见的线。其它的样品继续移动到膜的未端,最终进入废物池被遗弃。
&反应区也含有金标结合的一种专利抗原(颜色指示剂),不管样品中有没有E.coli&O157:H7,它都被样品洗脱。金标控制指示剂通过膜移动到阴性控制区与专利抗体结合形成一条可见的线。无论样品中有没有E.coli&O157:H7抗原,控制线都将在控制区(C区)形成,来确保试验正常进行。
增菌液滴入8-10分钟后,观察试纸C区和T区有无明显的线。在C和T区都有可见的线,则结果为。C区有线、T区无线,则结果为阴性。如C区无线,无论T区有没有线,则实验无效。
(三)ISO-GRID检测系统& ISO-GRID检测系统是一种基于疏水性网膜(HGMF)的过滤系统。该系统通过使用这种含有1600个小方格的膜,来对进行检测或计数。& 首先,稀释的样品通过5&um的不锈钢预过滤器过滤,过滤掉可能引起微生物分析误差的样品残渣颗粒。& 然后,样品通过流水的滤膜过滤。再将滤膜放在特异性的琼脂培养板上培养,以检测目标微生物。培养完成后,在膜上检测目标微生物,并记录阳性区域的数量。& 滤膜不会染上琼脂培养基的颜色,从而很容易地区别微生物,并进行鉴别和记数。此方法快速简便,重复性好,而且,除大肠杆菌O157﹕H7外,还适用于沙门氏菌、、、大肠菌群及大肠杆菌的检测和计数。 (四)单克隆酶联免疫分析筛选方法 该方法是对所有食品E.coli&O157:H7的存在进行筛选,不是确证试验,因为试验中所用的单克隆抗体可能与少部分的非E.coli&O157:H7有交叉反应。 阳性的检疫结果应是客观的,必须配有450nm滤光片的光度计来进行测试。只有当阴性和阳性对照均有可接受的光密度读数时,阳性结果才是有效的。 原理&E.coli&O157:H7原的检测是基于用特异性单克隆抗体进行的酶免疫分析(EIA)。用抗E.coli&O157:H7抗原的单克隆抗体包被于微量小孔的内表面,将样品和对照加入小孔中。样品中如有E.coli&O157:H7抗原存在,则将被吸附在孔上的特异性抗体吸收。冲洗后,加入结合剂与被抗体吸收的E.coli&O157:H7抗原结合&。再冲洗小孔,除去未结合的结合剂,然后再加入酶底物。当用终止液终止反应时,出现的蓝色则转变为黄色。样品中是否有E.coli&O157:H7抗原取决于颜色产生的光密度。 (五)&自动酶联荧光免疫检测系统(VIDAS)筛选法 此E.coli&O157:H7的抗原鉴别是基于在仪器内进行的酶联荧光免疫分析。像吸液管的装置是固相容器(SPR),在分析中既作为固相也作为吸液器。SPR包被有高特异的单克隆抗体混合物。将一定量的增菌肉汤加入试剂条,肉汤中的混合物在特定时间内循环于SPR内外。如果有E.coli&O157:H7抗原存在则与包被在SPR内的单克隆抗体结合,其他没有结合上的化合物被冲洗掉。结合有碱性磷酸酶的抗体在SPR内外循环与结合在SPR内壁上的E.coli&O157:H7抗原结合,最后的冲洗步骤将没有结合的接合剂冲洗掉。底物—4-甲基伞形磷酸酮被SPR壁上的酶转换成荧光产物—4-甲基伞形酮。荧光强度由测定。实验结果由计算机自动分析,产生基于荧光测试的试验值与标准相比较后打印出每一个被测样品的阳性或阴性结果报告。 (六)&E.coli&O157:H7快速酶触反应法 快速酶触反应是根据细菌在其生长繁殖过程中可合成和释放某些特异性的,按酶的特性,选用相应的底物和指示剂,将它们配制在相关的培养基中。根据细菌反应后出现的明显的颜色变化,确定待分离的可疑菌株,反应的测定结果有助于细菌的快速诊断。这种技术将传统的细菌分离与生化反应有机的结合起来,并使得检测结果直观,成为今后微生物检测发展的一个重要发展方向。& (七)DNA探针技术 DNA探针技术是最新发展起来的一项特异、灵敏、快速的检测方法,但因有一定比例的假阳性反应,故所有阳性结果必须用标准的培养方法加以确证, 原理 用特异性的DNA探针进行E.coli&O157:H7(rRNA)的检测。待检样品经前增菌、选择性增菌和后增菌后,溶解细菌。加入标记好的E.coli&O157:H7异性的探针用于。如果待检样品中&存有E.coli&O157:H7的rRNA,荧光素标记的检测探针和多聚脱氧腺嘌呤核苷酸(polydeoxyadenylic&acid,poly&dA)末端捕获探针将与目标rRNA序列进行杂交。然后把包被有多聚酸(polydeoxyadenylic&acid,poly&dT)(固相)的测杆溶液。Poly&dA和pol&dT之间进行碱基配对,便于探针捕获:目标杂种核酸分子结合在固体载体上,未接合的探针被冲洗掉。测杆被培养在辣根过氧化物酶-抗荧光素接合剂中。接合剂与存在于杂交检测探针上的标记物结合,未结合的剂被冲掉。并将测杆培养于酶底物-色原溶液中,辣根过氧化物酶与酶底物反应,将色原转变为蓝色化合物。一旦遇酸反应便停止,色原的颜色变为黄色。在450nm处测量吸收值,吸收值大于临界则表明在待检的样品中存有E.coli&O157:H7。 (八)聚合酶链反应(PCR)技术 PCR技术原理为提高DNA探针的敏感性,可先将靶序列扩增,增加&DNA数量,使其达到足够的检测量,若反应以动力学为基础,则能定量分析。1983年&Millus和&Cetus发明了最基本的扩增&DNA或增加样品中特殊核苷酸片段数量的方法-聚合酶链反应即PCR法。PCR法建立在三步重复发生反应的基础上。①通过热处理将双股DNA变性裂解成单股DNA;②退火延伸引物至特异性寡核苷酸上;③促延伸引物与DNA配对合成模板,引物退火,变性DNA片段,引物杂交形成的模板可参与再次反应。溶液中核苷酸通过酶聚合成相互补对的DNA片段,并能重新裂解成单股DNA成为下次PCR复制的模板。因此每次循环特异性DNA将以双倍量增加。典型扩增经过20~40次循环能引起100万倍的扩增。在PCR反应中引人使反应得以半自动化和简便反应程序。用扩增DNA进行的PCR反应具有无与伦比的优越性。
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