大肠埃希菌的常规检验项目-微生物检验技师考试辅导讲义
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2014微生物检验辅导：大肠埃希菌的常规检验项目
CDC将大肠埃希氏菌O157：H7列为常规检测项目
EHEC的血清型&50种，最具代表性的是O157：H7.在北美许多地区，O157：H7占肠道分离病原菌的第二或第三位，是从血便中分离到的最常见的病原菌医学.全在.线.提供.，分离率占血便的40%，6、7、8三个月O157：H7感染的发生率最高。且0157是4岁以下儿童急性肾功衰的主要病原菌，所以CDC提出应将大肠埃希氏菌0157：H7列为常规检测项目。
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版权所有& CopyRight , , All Rights Reserved大肠杆菌O157:H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制--《中国预防兽医学报》2010年05期
大肠杆菌O157:H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制
【摘要】：为建立快速检测鼠感染大肠杆菌O157∶H7后的抗体,本研究采用颗粒为20nm的胶体金溶液标记纯化的羊抗鼠IgG,制备金标探针,喷涂于玻璃纤维膜上;将大肠杆菌O157∶H7抗原和抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体F1分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,组装成鼠血清O157∶H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条。实验结果表明,该试纸条仅与O157∶H7阳性鼠血清发生特异性反应,用该试纸条与常规间接ELISA平行比较检测O157∶H7免疫鼠血清,抗体效价分别为1×106和1×105,两者的敏感度相当。该试纸条操作简便,10min可出结果,适用于调查与追溯鼠O157∶H7感染状况时的现场检测。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：S854.4【正文快照】：
大肠杆菌O157∶H7是一种重要的人兽共患病原微生物,人感染O157∶H7可患腹泻、出血性结肠炎、溶血性尿毒综合征及血栓性血小板减少紫癜等严重并发症,严重者可导致死亡[1]。O157∶H7的感染因具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性以及抗生素治疗可能会加剧病情等特点,已成为
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岳西县肠出血性大肠杆菌O157:H7重大疫情处理预案
作者：佚名&& 来源：www.yxcdc.org&&浏览： 次& 发布日期：<FONT color=#7-4-2&【字体： 】
（2）、爆发疫情调查&接到爆发疫情后，卫生局，应立即成立疫情应急处理小组，立即组织医疗、防疫力量赶赴爆发现场，及时开展疫情调查。其步骤为：核实诊断―确认爆发―初步调查―构成初步假设―进行详细调查―资料分析―检验假设―采取防制措施―评价干预措施的效果―总结报告。另外还应进行流行病学调查。四．疫情处理肠出血性大肠杆菌0157：H7疫情处理（一）散发病例处理（1）隔离治疗：对确诊患者及时隔离，积极开展救治。对细菌学确诊但无症状的感染者，凡从事饮食服务行业、屠宰行业、护理员、保育行业、供水行业的，应暂时停止工作，经治疗在临床症状、体征消失后，连续两次粪检阴性后，方可恢复工作。（2）指导和教育患者或感染者，养成良好的个人卫生习惯。（3）流行病学调查，根据腹泻病调查表内容做好调查，核实诊断，了解传染来源，污染范围。出现感染者的地区，应立即对生活供水系统进行病原菌检测。（4）对病家厕所、排泄物、家庭环境、餐饮具、食品、衣物、床上用品、蔬菜等实施消毒措施。（5）接触者管理：与病人同住、同吃的家庭成员，或其他人员，需要连续两天采集粪便标本，进行细菌分离鉴定，对密切接触者和医务人员要进行严格个人卫生措施。&（二）暴发疫情处理暴发疫情处理分级原则（1）疫情发生在1―2个乡、镇（街道），由县级处理，地（市）级卫生行政部门指导，无首例处理经验的，省市疾病控制机构派员技术指导。（2）疫情波及3个以上乡镇（街道）由市县会同处理，省级卫生行政部门指导。（3）疫情波及5个以上乡镇（街道）或毗邻2个以上县（市），省级市县级卫生行政部门联合组织调查处理，国务院卫生行政部门指导。五、组织领导暴发疫情确定后，疫情发生地各级政府要成立由主要负责人或主管领导为首的由卫生、财政、工商、公安、建设、教育、宣传、农业、爱委会等有关部门领导组成的疫情控制工作领导小组。其职责是：组织有关部门和下级政府开展各项预防控制工作；根据控制疫情需要，及时安排必要的防治经费；落实责任制，依照有关法律法规采取行政、技术和经济措施，督促检查各项防疫措施的落实；对控制疫情作出贡献的单位和人员给予表彰及奖励，对拒不履行职责，玩忽职守，造成疫情扩散的单位和人员，依法追究责任。（一）、有关部门职责（1）卫生行政部门& 组织制订防治对策，当好政府参谋；组织防疫、医疗机构实施各项预防控制措施；组织医疗机构抢救治疗病人；加强传染病防治监督管理，对违法行为进行处罚。（2）财政部门& 安排控制疫情的必需经费；对上级下拨的专项防治经费，及时拨付到位。（3）工商行政管理部门& 负责取消无营业执照的食品生产、经营单位；根据控制疫情的需要，暂时关闭或禁止可疑食物或者传播疫情的食品的生产经营。（4）建设部门& 加强集中式供水，自备水单位的管理，确保供水符合国家饮用水卫生标准；组织做好城镇厕所、垃圾、粪便及时清运，消毒和灭蝇。（5）宣传部门& 组织新闻、出版、广播、电视单位开展预防控制疫情的健康教育；严格遵守疫情管理规定，不得报道疫情。（6）农业部门& 负责对疫区宿主动物治疗管理（指0157：H7）。（7）公安部门& 配合卫生部门做好对病人的隔离及疫点，疫区的管理；必要时，参与疫区的封锁。&&&[2]&&
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大肠埃希氏菌O157： H7/NM 套 装生化鉴定管11 种（GB 4789）培养的保持培养物是应该保持在孵箱中的。孵箱可以自动将O2与CO2混合很快达到培养基的设计要求，空气中的氧浓度比血液和脑脊液中要高得多。对于某些细胞的生长，包括神经原，应使氧含量处在一个较低的水平。可以用孵箱达到这个标准，但这样的孵箱并未广泛使用。高湿度可避免培养皿中大肠埃希氏菌O157： H7/NM 套 装生化鉴定管11 种（GB 4789）的蒸发，保持孵箱中的湿度通常是在箱底部放上一大盆水，这水应该经常换，乘水容器应经常消毒以防霉菌生长。若孵箱曾被霉菌孢子严重污染过，那么要想完全去除污染则会非常困难。当培养物必须要长期保持在孵箱中时，应采用较少培养基的瓶、皿，且将盖子盖紧以避免蒸发，或采用相应的按比例供空气的孵箱。温度的精确调节应定期检查，孵箱温度常设置为37℃或较低温度。细胞在低温时可有较长时间的忍耐限度，但当温度升至39℃时，几小时内即死亡。维持培养物的最佳方案常常改变。例如培养胶质细胞时，要经常换液以使其增殖达到最大。而在培养某些神经原时，则要求尽可能少的换液，神经原在两次换液之间的条件下长的最好。大脑皮质的培养要求在不换液的情形下维持一个月以上。另一方面，象海马神经原那样的细胞，倚赖于条件培养基，若换液太频繁细胞就会衰退，此时，可采用1/3或1/2换液的方式大肠埃希氏菌O157： H7/NM 套 装生化鉴定管11 种（GB 4789）操作步骤：1．取 2ml 左右的L-多聚赖氨酸（0.1mg/ml） 包被培养板或coverlip；2. 将出生小于24h的乳鼠6-8个用70%乙醇消毒，逐个断头，取脑，放入冰浴的解剖液中；3. 用弯头镊镊取海马和皮层，去除脑膜和血管，分别放入干净的平皿中，用手术刀片分别将海马和皮层切细。4. 将组织块置于15ml解剖液配制的0.25%胰蛋白酶中37?C，静置20min，取出时，勿摇晃。5. 吸弃去上层胰酶液，下层组织沉淀约2ml, 加3ml种植液冲洗一遍。静置约3分钟。6. 吸弃去上层液体，下层组织沉淀约2ml, 加3ml种植液冲洗一遍。离心800rpm×1min 7. 吸弃去上层液体，加2ml种植液8. 用一根吸管，头烧细，冷却，轻轻吹打约15-20次，制成细胞悬液。9. 取50ul细胞悬液稀释到1ml, 计数4大格。10. 细胞浓度=4大格细胞数/4×稀释倍数×104/ml 11. 例如120/4×20×104/ml=6×106/ml 12. 按照0.6--2×106/ml的密度接种神经元。13. 24h后全量换液成饲养液14. 每三天用Neuronbasal使用液半量换液。15. 接种后3-5天，加阿糖胞苷至终浓度10uM作用48小时，抑制胶质细胞的过度生长。大肠埃希氏菌O157： H7/NM 套 装生化鉴定管11 种（GB 4789）相关产品如下：yb1145&& &M17培养基&& &250g&& &用于乳酸链球菌和嗜热链球菌的选择计数&& &M17 Medium&& &&& &弧菌检测培养基&& &&& &&& &yb1151&& &碱性蛋白胨水（APW）&& &250g&& &用于霍乱弧菌选择性增菌培养（SN标准）&& &Alkaline Peptone Water&& &&& &yb1152&& &TCyb琼脂&& &250g&& &用于致病性弧菌的选择性分离（GB，SN标准）&& &Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar&& &&& &yb1153&& &氯化钠多粘菌素B肉汤基础（SCPB）&& &250g&& &用于副溶血性弧菌选择性增菌培养，用前应无菌加入多粘菌素B（SN标准）&& &Sodium Chloride Polymyxin Broth Base&& &&& &yb1154&& &庆大霉素琼脂&& &250g&& &用于霍乱弧菌选择性分离培养&& &Gentamycin Agar&& &&& &yb1155&& &四号琼脂基础&& &250g&& &用于霍乱弧菌选择性分离培养&& &No.4 Agar Base&& &&& &yb1156&& &我妻氏培养基基础&& &250g&& &用于神奈川现象试验（SN标准）&& &Wagstsuma Agar Base&& &&& &yb1157&& &3%氯化钠碱性蛋白胨水 && &250g&& &用于副溶血性弧菌的前增菌培养（SN标准）&& &3%NaCl Alkaline Peptone Water&& &&& &yb1158&& &60g/L氯化钠蛋白胨肉汤&& &250g&& &用于副溶血性弧菌的前增菌培养（SN标准）&& &60g/L NaCl Peptone Water&& &&& &yb1159&& &氯化钠三糖铁琼脂&& &250g&& &用于副溶血性弧菌的生化反应筛选（SN标准）&& &NaCl Triple Sugar Iron Agar&& &&& &yb1161&& &胰胨大豆琼脂斜面（高盐）&& &250g&& &培养副溶血性弧菌，做细胞色素氧化酶实验（SN标准）&& &Trypcasein Soy Agar&& &&& &
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大肠杆菌O157：H7鸡卵黄抗体（IgY）酶标与ELISA检测方法建立.pdf86页
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与ELISA检测方法建立
肠出血性大肠杆菌E．coli0157：H7的传播与流行己逐渐成为威胁人群健
康的重要公共卫生问题。本课题通过对E．coli0157：H7特征抗原分离提取及
HRP 标记方法，建立检测E．coli0157：H7的免疫学方法。
0157：H7的抗原分离与鸡体免疫。菌种经鉴定后，采用热酚水法
糖抗原 0．specificpoLysaccharide
热灭活法制备 作为免疫原，分别免疫产蛋鸡，收集免疫后的高免鸡蛋。
特异性IgV的制备与特性研究。对以上3种免疫原产生的高免鸡卵黄，
骤，得到纯化IgY样品 anti-LPSIgY、anti-0-SPIgY、anti．OH
IgY ，其纯
的抗体亲和力排序为：anti-OH
IgV anti―LPSIgv anti―O-SPIgY：通过交
叉反应实验得到3种抗体特异性排序为：anti．O．SP
IgV anti．LPSIgV
抗E．coli0157：H7特异性抗体anti．O．SP
IgY；其中过碘酸钠氧化法较戊二醛
二步法的酶结合率、标记率高，克分子比值合适，而且酶标抗体的酶活性与
免疫反应性均高出后者，所以过碘酸钠氧化法是HRP更可取的Igg标记方
制得的酶标抗体的效价也最高 1：640，酶标抗体起始浓度lmg／mL 。
1：80 、酶标抗体最佳工作浓度 anti．O．SP1：160 、酶标板
检测E．coil
感性实验、重复性实验证明本课题建立的夹心ELISA最低检出量为
重复性好 变异系数 Cv 小于10％ 。
本课题从E．coli0157：H7鉴定培养与不同抗原的分离制备开始，完成了
检测方法，为E．coli0157：
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