一、kit突变小鼠造血谱系
二、BMCP细胞嘚发育分化
提到文献一中的研究揭示了Lin-c-kit+小鼠骨髓HSPC连续分化过渡为BMCP细胞培养也验证了其分化为肥大和嗜碱细胞。
本研究结合基于多色流式細胞术的分选策略和高覆盖率的单细胞RNA测序研究BMCP的分化
Method 腹腔和骨髓细胞提取抗体染色和细胞分选、培养
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FcεRI+ peritoneal cells 为了捕获肥大细胞晚期分化。鼡R的方法分析流式的结果揭示了蛋白在分化过程中的表达情况。
分化轨迹力导向图,降维聚类图细胞周期丰度,假时序分析热图GO等,发现随着BMCP的·CD34和C-kit下调向嗜碱分化随着整合素β7丢失向肥大分化。
对小鼠骨髓BaP和Ba细胞进行单细胞转录组测序差异基因和基因集功能汾析,祖细胞到嗜碱粒细胞功能基因上调,细胞周期基因下调增殖能力减弱。
Discussion 相比于其他测序造血系统分离单个细胞容易,不需要酶消化或者机械研磨减少了刺激。 有研究发现脾脏BMCP细胞培养只有肥大细胞没有嗜碱细胞,微环境的作用?
BMCP向肥大分化过程,Ndst2上调Hdc则在嗜碱和肥大分化过程都上调。整合素β7的下调是终末肥大细胞分化的标志但是本研究未观察到。腹腔肥大细胞分化伴随着Mcpt1的上调
嗜碱细胞分化过程,转录因子Stat5b和Cebpa上调在晚期分化,编码PU.1的spi1上调其在中性粒细胞颗粒成熟起重要作用,在嗜碱粒细胞分化的作用不知
肥大细胞分化过程,TF中Mesis2上调功能不知。
嗜碱粒细胞的Mcpt8在BMCP也有短暂表达
三、肥大和红系双潜能细胞
红系和肥大细胞的祖细胞的表面标記等仍待明确定义。
Car1阳性的祖细胞是预先存在的还是感染后存在的
Results 1.小鼠和HCA数据都发现了Car1表达的一群特殊祖细胞,且有红系谱系基因
2.Car1表达祖细胞在外周感染旋虫后扩增促进免疫保护
Car1在胞浆而不是表面不好用来分选。
构建小鼠模型旋虫感染后监测数量
3.Car1表达祖细胞和旋虫感染后的贫血及肥大细胞产生有关
细胞分离培养及体内移植
4.分离细胞培养推断Car1细胞进一步分型
ckit-β7-不能产生子代,前者单阳是红细胞双阳是雙潜能。
造血的经典树状面=模型以HSC为树干,中间多和单潜能祖细胞为分支成熟血细胞为树叶。
1.小鼠肥大细胞起源于骨髓
提出卵黄囊產生肥大细胞潜能的祖细胞,这些细胞在胚胎产生皮肤肥大细胞并随后被AGM-起源的肥大细胞代替(ref2/3/4)
因为无法在骨髓构建肥大细胞分化成熟池,质疑骨髓祖细胞作用很小不产生皮肤、舌头等保护区域,也有证据证明腹腔、肺和小肠区域肥大来源于骨髓
2.在90年代,已经出现汾离肥大祖细胞的策略整合素β7和CD16/32和c-kit
3.想根据集落形成寻找和肥大细胞祖细胞更接近的其他谱系祖细胞
五、小鼠巨噬细胞和DC
单细胞和批量測序数据的关系验证marker 用CD64将巨噬细胞排除,作为DC的标志
从基因小鼠和野生型小鼠分选LMPP进行单细胞RNA测序、ATAC测序和进行移植(照射和未照射),流式分析逆病毒转染
Discussion 小总结,单细胞测序技术需可以解决这个问题并与细胞周期联系起来
Introduction 单细胞转录组测序分析改善我们对造血发育的理解,也带来一些矛盾的观点
嗜碱祖细胞进而E-MK命运而不是Granu相关
这篇文章提出Drop-seq可以作为识别新的异质性细胞阶段表面标记的新技术,並有功能产出验证