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介绍使用 AppliedCell? 多能干细胞冻存会培养基以及 Advance 多能干细胞冻存会培养基培养嘚细胞冻存会， 本方法适用于 AppliedCell? 多能干细胞冻存会培养基以及 Advance 多能干细胞冻存会培养基培养的细（同样适用于 mTesR  以及 E8  系统培养的细胞冻存会）冻存以及复苏前后，应当使用同一种培养基复苏传代后可以更换其他培养体系。

Serum-Free 干细胞冻存会冻存液（AC-）是埃泽思生物专为 ES/iPS 细胞冻存会设计的一款化学成分确定无血清，无动物源成分且无需程序降温的高效冻存液。具体冻存及复苏操作方法如下：1、冻存：以下操莋方法以 6

（1） Serum-Free  干细胞冻存会冻存液为即拿即用且 4℃ 保存，冻存液拿出后应快速放回 4℃；

（2）  使用多能干细胞冻存会消化液（AC-1001008）消化细胞凍存会；

（4）  小心吸掉上清液不要干扰细胞冻存会团；

（5）  用 1 mL  冻存液重悬细胞冻存会，并均匀分装到冻存管中采用非程序降温法，将凍存管直接放入-80℃ 冰箱中冻存 24 h 后转移至液氮中长期保存。

2、解冻：预先包被细胞冻存会培养板人 ES 和 iPS 细胞冻存会解冻后应立即接种到培養板中。

（2）  在水浴锅中持续晃动冻存管37℃ 水浴锅中快速解冻细胞冻存会，直至细胞冻存会完全融化；

（3）  取出冻存管用 70% 乙醇擦拭冻存管表面；

（4）  准备 15 mL  离心管，预先加入 5 mL  多能干细胞冻存会培养基将细胞冻存会悬浮液缓慢逐滴至15 mL 离心管中，尽量保持细胞冻存会聚团状態；

（6）  吸掉上清注意不要干扰细胞冻存会沉淀，使用 1 mL  多能干细胞冻存会培养基轻轻地重悬细胞冻存会3-5 次不要破坏细胞冻存会聚团状態；

（8）  置于 37°C  细胞冻存会培养箱中。在前后左右呈十字形摇动培养板板 5  次以均匀分散细胞冻存会；

（9）  每天更换培养基，并显微镜下觀察细胞冻存会状