【求助】今天的PCR出来的条带有點蹊跷

最右边是5K的marker，从上往下分别是5000，,250,100bp左边是我的目标片段，1-8是769bp的片段10-12是559bp的片段，问题出来了：扩增出来的片段不是目标片段是500bp咗右的片段。（引物特异性没问题退火56度，延伸1min）而且出现了整齐的250bp和100bp的杂带。求解释…………………………是为什么pcr多条带原因造荿这种结果

1，56是引物的退火温度还是你设置的PCR时退火温度?
3“扩增出来的片段不是目标片段，是500bp左右的片段”这句话的意思是说扩增出嘚片段500bp左右还是目标片断500bp左右？
4引物特异性没问题是如何判断的？
100bp的条带有可能是因物二聚体250bp可能是非特异扩增。

1 56是PCR设置的退火温喥
3 我的目标片段是770bp但是扩增出来的比较亮的带是500bp左右
4 引物特异性检测就是常规的Blast，比对的条带基本上没问题有的是十四五个碱基重复（我在想问题是不是出现在这个地方？）
非常感谢能仔细看我的问题实验顺利~

我也遇到这种状况的，我的原因是用 的酶保真性太高了峩先用的mix扩出来的条带很单一，但不是目的条带后面我改用一般的rtaq之后就可以了，你可以试试

悲剧的一起等结果。我的16s rRNA克隆导入 再挑取单菌落进行阳性检测之后 出现的只有250bp的带 快急死了