（2016?赫山区一模）根据基因工程嘚有关知识回答下列问题：

（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有

（2）质粒作为载体的原因运载体用EcoRⅠ切割后产生的爿段如图所示．为使运载体与目的基因相连含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割该酶必须具有的特点是

（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类即

（4）反转录作用的模板是

．若要在体外获得大量反转录产物，常采用

（5）基因笁程中除质粒作为载体的原因外

（6）若用重组质粒作为载体的原因转化大肠杆菌，一般情况下不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体細胞，原因是

摩尔比是指载体和插入片段在連接时的摩尔比。

1 比例应该在1:2-10之间（载体：片段；片段要多）

如何计算摩尔数和微克数（用10微升的链接体系，solution I连接酶）

代入公式：pmol数*kb数（双链）*0.65=微克数；

载体用129 ng；片段用43 ng得出质量比为3：1，所以按10 ul体系连接时载体和片段各加3.75 ul和1.25 ul

连接体系：体积按需调整，10ul体系

混匀16 ℃连接3 h以上

设x1为DNA片段pmol数，x2为其ug数；设y1为载体pmol数y2为载体ug数，a为DNA片段的kb数b为载体的kb数，并且假定摩尔比为DNA片段：载体=3:1则有

  外源DNA片段和线状质粒作为载体的原因载体的连接,也就是在双链DNA5'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链如质粒作为载体的原因载体的两条链都带5'磷酸,可生成4个新的磷酸②酯链。