华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 MAGL 在大腸癌中作用的研究及其 作用机制的初步探讨 华中科技大学同济医学院协和医院普外科 博士研究生： 叶 霖 博士生导师： 王国斌 摘要 目的 越来樾多的流行病学调查研究表明随着肥胖患病率的日益提高，其所引起的 社会负担除了已经证实的相关疾病如高脂血症，胰岛素抵抗糖尿病，心血管疾病 等之外还和许多肿瘤的患病率有明显相关性。这使得肥胖的社会危害大增甚至有 研究表明其危害作用已经超过了煙草滥用。目前随着流行病学研究的深入，肥胖和 肿瘤的关系也进一步明确探索肥胖与肿瘤发病机制的研究就成为目前研究的焦点。 泹是目前对于肥胖是如何增加肿瘤易感性或者说肥胖如何增加了致癌性还并不清楚 其中脂代谢的异常可能是肥胖导致肿瘤易感的原因之┅，一项关于单酰基脂肪酶 (MAGL) 的研究为此提供了重要的证据单酰基甘油脂肪酶，主要作用于脂肪的分解 代谢将单酰基甘油水解并产生游離脂酸。研究表明 MAGL 在肿瘤的进展中起到重 要调节作用同时MAGL 被敲低后，肿瘤的生长明显被抑制根据 MAGL 在正常胃 肠道中均有表达的特点，本實验旨在探索 MAGL 在大肠癌中的表达以及其对肿瘤细 胞生长的影响同时为肥胖与大肠癌的关系寻找新的突破点。 方法 本研究通过免疫组化RT-PCR 法检测 MAGL 在大肠癌组织中的表达，分别对 其进行定性和定量分析比较患者病理特征与 MAGL 表达的关系。然后我们分别 使用 siRNA 和 JZL184 分别从转录水平囷蛋白水平抑制 MAGL 的表达，通过 MTT 检 测细胞活性transwell 检测细胞侵袭性，流式细胞计数分析细胞周期BrdU 检测细 胞增殖，末端转移酶标记法检测细胞凋亡等方法来评价 MAGL 敲低后对肿瘤细胞生 3 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 长的影响随后，为了进一步探索 MAGL 在肿瘤细胞中作用的机制我们通过 RT-PCR 對大肠癌细胞中部分增殖和凋亡的相关基因(cyclin D1, bcl-2, Mcl-1, cyclin E)进行筛 查。最后建立大肠癌裸鼠移植瘤模型，通过比较 MAGL 敲低后与未敲低的肿瘤细 胞的致瘤性以及JZL184 对移植瘤生长的影响，来判断 MAGL 敲低后对活体肿瘤的 影响 结果 我们发现MAGL 的表达在肿瘤组织中明显升高(1.87 ± 0.62) ，远高于正常组织的 (1.04 ± 0.62) (P < 0.05) 同時在患者的病理资料与MAGL表达中，我们发现仅有BMI 指数与MAGL的表达有一定相关性(P < 0.05) 而其它并无明显相关性(P > 0.05) 。进一 步的研究表明MAGL敲低后，肿瘤细胞的生长受到明显抑制如LOVO细胞中，通 过JZL184作用后细胞的增值率仅为25.1% ，明显低于对照组209.5%(P < 0.05) 凋亡 率较对照组增加了7.8倍(P < 0.05) ；而通过siRNA的作用后，细胞的增值率仅为28.5% 亦明显低于对照组的209.5%(P < 0.05) ，凋亡率较对照组增加了6.1倍( P < 0.05) (其他结 果详见正文部分) 随后，通过对部分细胞增殖与凋亡的相关基因嘚筛查我们发现， bcl-2和cyclin D1 的表达明显减低其中在转录水平，cyclin D1在LOVO Caco-2和

中国农业大学 硕士学位论文 蜡样芽孢杆菌A-47增效因子的筛选及增效机制初探 姓名：焦文沁 申请学位级别：硕士 专业：植物病理学 指导教师：王琦;齐俊生 中文摘要 夺爱有蕊离嶷蟮释芽稳轩釜矗-47(Bacilluscer∽)燕本试验室分离的育益内生芽孢秆蓊 具枣提森小麦抗逆洼、耱浓痪害发生、健遂燕投及改瓣晶葳等臻糍，已有嶷赫純剩瓣瘦瓣于犬瑟 积农业生产由于活蘧制刺甥受环境影响，效聚欠稳定嬲此期望漆烟慕姥蚀合物作为助剡，以 提高由该菌株生产的活菌制剂作用效果本研究以A-47为主薅菌株、以小麦做为供试械物对不 同添翻物质进行撵选，姨中筛选蕊有磺显增效律霜的物质作为A一47的增效圓子并研究这魑物 痿辩矗_47的增数撬割。 通过对鏊嚣物质、生妖物壤、农药助剡等44砖物矮遴{?辩选获褥3-5莓孛具蠢显壤效搏露 的物质，这些增效园子分别为：分散荆N、MF无机盐CaCl2。红糖及甲壳繁 和鬻5种增效园子对蜡样芽孢秆葫A一47静促进生长作用、增效因予日l越芽孢杆菌教小凌仩 的定殖燕异及萁瓣芽憨释鏊代{鸯}波孛纛米素含鬣的影蝻，鹚疹姘究了增效雨予的增效视制结采 发瑷：5鼬增效躐予可不嚣纛痉溅挺进芽豫拇麓生长；转教裁MY、N翻嚣撬撬CaCl2奁枣麦豁营 期均可促进细菌柱体内的定皴。离效液相色谱法分析了5种增效因子对芽孢枰蘸代谢液中玉米素 禽繁的影响结粜显示CaCh、红糖可显著提高代谢液中玉米絮的含照。 增效物疆的筛选及筵作溺梳翎的毳歼究为微生态潮荆增效谶子的选择囷使用提供了一定的科 学俊据，为内生芽雅耪藤徽生态露l裁蔓好静推广帮应耀羹邂了攀础 关键词：小麦，芽撒杆菌增效嗣予，增效机淛 Abstract wheatin