【求助】western blot湿转时，用恒压还是恒流条件是多少？

我用的是bio-rad的western blot电泳应该恒压还是恒流仪以前转膜时，用的都是恒壓70v，150min最后也能出结果，但结果不好在论坛上，我看大家用的都是恒流我想知道是不是我转膜条件错了。谢谢各位大侠！

我通常用恒压100v， 60 min效果还可以。
转膜缓冲液最好用新配制的加上预染MARKER吧，可以监测一下转膜的情况具体操作大家的可能差不多，多注意一下細节问题就是了比如说在作“三明治”的时候注意一下速度，冰块降温根据蛋白的大小和实验室的具体情况选择不同的膜等等。
在刚開始作WB的时候摸条件是必需的失败也是正常的，继续加油哈！

请问各位大侠有没有做过170kd的蛋白呐，我用过250mA 2h和100v 1h均没能转成功后来索性換成400mA转了2h倒是转到了膜上，但是转移液发热太明显感觉外面和内部的冰浴效果不明显，不知对转膜电流和电压有没有上限啊请高手指點下，如何才能使转膜效果更好呐另外，不知pvdf膜一定需要甲醇活化吗我先把它放进水里根本不能浸透的

PVDF用水是浸不透的一定要甲醇。版内搜索一下PVDF有很多帖子的。

综上所述：你的问题主偠是PVDF膜没活化其次是转的时间不够。

我们的蛋白分子量65KD用的是伯乐得，恒压转100V，120min～～用了几年了效果很好

我用的是恒压，湿转bio－rad，100V2H,老是效果不好我的蛋白58KD，我发现恒压的过程中电流基本上都在1A以上，缓冲液都沸腾了因为我是在跟国外的博士后后面作实验，峩想换条件但是他老不换，所以转膜一直在折腾效果一直不好，快一个月了烦死了天天在弄这个．以前在学校用的半干转，恒流效果很好，到这里只有伯乐的湿转仪．晕啊我认为还是恒流好，不知道为什么恒压１００v电流怎么那么高，buffer