各位师兄师姐 想请教个问题～
同样的样品 同种反应条件 同样的反应体系 为什么两次pcr跑出来的条带完全不一样 模版都是动物dna组 现在这个结果已經影响我酶切结果了

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RT-PCR中可能遇到的问题及处理方法

摘偠：本文就在RT-PCR实验中可能遇到的包括在琼脂糖凝胶电泳分析中看到少量或没有RT-PCR产物、在琼脂糖凝胶分析中看到非预期条带、多聚糖同RNA共沉淀、cDNA第一链合成错误或数量少、RNA二级结构太多等问题进行分析，并提出了相应的可能的处理方法

RT-PCR)，是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用嘚变形由一条RNA单链转录为互补DNA(cDNA)称作“逆转录”，由依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）来完成随后，DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成随每个循环倍增，即通常的PCR原先的RNA模板被RNA酶 H降解，留下互补DNA

RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的RNART-PCR廣泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种RNA的含量RT-PCR的关键步骤在是RNA 的反转录，要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质

AMV RT：禽类成髓细胞瘤病毒逆转录酶

MMLV RT：莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶

dNTPs：脱氧核苷酸

组织剪碎加入1ml Trizol，冰上匀浆（边匀浆边暂停）转入一新EP管中（1.5ml），室温保存5min加氯仿0.2ml，振荡混合（手摇剧烈）室温放置5min。10000 rpm 4℃离心15min转移上层水相（吸70%）到一新EP管中，加异丙醇0.5ml,振荡混合室温保存10min。12000rpm 4℃离心15min倒掉上清，加1ml