荧光定量pcr检测标准三步法反应条件怎么设置

点击联系发帖人 时间：2016-07-05 07:55

荧光定量pcr检测标准

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qpcr两步法（解链-退火延伸）和三步法（解链-退火-延伸）这两个方法各自的优缺点是什么

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用ABI7500在进行实时荧光定量时，退火温度一定要60℃吗还是根据引物来？每次的结果都有黄色的三角符号出现在上面是引物出现问题吗？

退火温度不一定是60度,根据引物来制定退火温度的.另外,如果可能,你的引物務必要在常规的pcr上实验下,确定退火温度以及最主要的是没有引物二聚体. 结果中出现了黄三角是因为你的产物出现了非特异性扩增,或者你的引物二聚体特别多.

引物的退火温度当然要看你设计的引物了，退火温度高在60度以上就可以两步法低的话就三步法，都是根据引物合成报告单上的温度设定的ABI没用过，第二个问题没法回答

引物的退火温度当然要看你设计的引物了，退火温度高在60度以上就可以两步法低嘚话就三步法，都是根据引物合成报告单上的温度设定的ABI没用过，第二个问题没法回答

很感谢，还请问在realtime之前需要用引物和cDNA做一下常規pcr确定退火温度和引物可否适用吗

退火温度不一定是60度,根据引物来制定退火温度的.另外,如果可能,你的引物务必要在常规的pcr上实验下,确定退火温度以及最主要的是没有引物二聚体. 结果中出现了黄三角是因为你的产物出现了非特异性扩增,或者你的引物 ...

那麻烦请问您需要怎样设計引物减少非特异性扩增呢？谢谢

很感谢还请问在realtime之前需要用引物和cDNA做一下常规pcr确定退火温度和引物可否适用吗？...

做预实验先用cDNA在不哃的退火温度下做荧光定量，看扩增曲线和融解曲线用两个曲线最好的温度进行正式的荧光定量。其实严格意义上来说是要先做标准曲线的，不过由于太麻烦大家好像都省略了。

您好请问三角的问题如何解决的啊

若果是复孔，很多时候是ct值的SD值太高就是加样要准確。还有另外一些情况详细在QC summary中可以看到

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