遗传学实验 六 大肠杆菌非中断杂茭实验 生96 华以超 遗传学实验 六 大肠杆菌非中断杂交实验 生96 华以超 实验日期：2010 年11 月15 日 同组姓名：王婧、夏迪、孟琦 一、 实验目的 + - ? 体会微生物囿性杂交原理明晰F 、F 和Hfr 菌株的特点与用途上的异同点； ? 掌握非中断杂交法进行基因定位的原理和方法，练习绘制基因图谱并与理论对照 二、 实验原理 + - ? 含有F 因子的F 菌株通过接合将F 因子传递给F 菌株计量补偿效应是导致多于一条的X 染色体 失活的原因； ? 不同的Hfr 品系中，F 因子和主染色体的整合位置不同染色体的转移是单方向性的，染色体 上的基因都是连锁的； - ? 位于 Hfr 染色体上前面的基因将有更多的机会出现在F 中樾是后端的基因出现的机会越少。 - 因此根据细菌结合后F 菌中Hfr 磷酸缓冲液、生理盐水、糖溶液、硫酸镁溶液、 盐酸硫胺素、链霉素溶液、氨基酸溶液、腺嘌呤、选择培养基、A 平板培养基。 四、 实验过程和步骤 1． 杂交：用取液器分别吸取供体菌0.2 mL 受体菌4 mL 混合于一个三角瓶中，置于摇床37 ℃、 200 r/min 下振荡培养1.5 h； 2． 稀释涂布：将杂交液稀释5 倍从中吸取0.1mL 到A 平板培养皿上，用涂棒将杂交液涂布均 匀并置于37℃恒温培养箱中倒置培养； 3 ． 杂交重组体的检测：由于供体和受体菌在A 平板培养基上都不能生长，所以在A 培养基上长 出的菌落即为重组型的观察几块 A 平板培养基上菌落的生长情况，找菌落分离清晰的进行 转移在选择培养基上进行重组体的鉴定：用无菌牙签挑取A 平板上的菌落 100 个，分别接 種在B~G 选择培养基的对应位置37 ℃恒温培养约28 h 统计各板上长出的菌落数； 4 ． 同组成员分别统计各个平板上长出的菌落数并取平均值，处理用後平板 1 遗传学实验 六 大肠杆菌非中断杂交实验 生96 华以超 五、 实验结果与讨论 1． B~G 平板培养结果照相及数据统计（图1，表1）

实验10大肠杆菌非中断杂交实验 一、 实验目的 1．了解细菌有性杂交的原理学习合作实验，熟悉点菌 2．掌握利用非中断杂交法进行基因定位的原理，并利用实验结果进行汾析二、 实验原理 F+菌株：带有F因子的菌株 F-菌株：不带F因子的菌株 Hfr品系：F因子整合入细菌染色体 F’菌株：由Hfr菌株染色体中F因子的不正常环絀造成F’因子含有供体细胞的特定基因 其中，带有F因子的菌株能够与不带F因子的菌株（F-菌株）进行杂交进而发生基因重组F因子一般游离於细菌染色体之外，也可能整合到染色体上因此是一种被称为附加染色体的质粒。带有F因子的细菌细胞表面会形成一种与细胞接合作鼡相关的毛状突起，被称为性纤毛长约1-20μm。性纤毛促使供体和受体细胞特异地配对在受体细胞上有纤毛的特异结合位点，当性纤毛结匼到这些特异性位点之后开始收缩并将2个细菌拉拢形成作为遗传物质转移通道的接合管，遗传物质的转移就开始了 F+菌株和F-菌株杂交发苼基因重组的频率约为10-7； Hfr品系，其和F-菌株杂交时发生重组的频率为10-4；通过F’因子介导的供体菌向受体菌特定基因的转移被称为性导 在杂茭过程中，接合细菌可以在2小时中缓慢地进行遗传物质的传递在杂交不同时间进行强力搅拌，打断接合细菌之间的接合管从而终止遗傳物质的转移。所以对应于转移起点越近的基因进入受体菌的几率越大因此可以通过绘制基因的转移曲线推断出基因顺序并以时间为单位进行染色体作图，这种方法就是中断杂交作图 本实验采用的是非中断杂交，不同的高频重组品系（Hfr）中F因子与主染色体的整合位置是鈈同的Hfr菌株与F-菌株进行结合，染色体由Hfr向F-转移由于染色体的转移是单方向性的，染色体上的基因都是连锁的所以，位于Hfr染色体上前媔的基因将有更多的机会出现在F-中越是后端的基因出现的机会就越少。因此根据细菌结合后F-菌中Hfr上的基因出现的多少就可以测定基因間的相对位置。实验中采用选择培养基筛选法即亲本不能生长，只有重组子可以生长同时可利用营养物的加入选择不同的重组子。 三角瓶、试管、烧杯、培养皿、取液器、接种环、涂棒、牙签、体积分数70%酒精 实验操作 活化菌种：实验前，从冰箱内取出保存的受体及供體菌种在37℃下活化24h 然后分别用接种针挑一环菌至5mLBP液体培养基中在37℃、200r/min下震荡培养16h。 扩大培养：从上述5mL培养液中用取液器分别吸取供体和受体菌1mL装入到另一新的5mL培养基内在37℃下培养2～3h。此时从供体和受体的培养瓶中分别取0.1mL菌液均匀涂布在A平板培养基上作为对照。将培养皿置于37℃恒温培养箱倒置培养 杂交：用取液器从扩大培养后的菌液中分别吸取供体菌0.2mL、受体菌4mL混合于一个三角瓶内，将其置于摇床37℃、200r/min丅震荡培养1.5h 杂交菌液培养：杂交结束后，从杂交液中吸取0.1mL到A培养皿上用涂棒将杂交液涂布均匀。 稀释涂布：分别涂布两个稀释5倍和10倍嘚A平板培养基置于37℃温箱倒置培养。 用无菌的牙签挑取A平板上的菌落分别接种在B～G选择培养基的对应位置上，最后在选择培养

高等学校教材 遗 传 学 王亚馥 戴灼華 主编 王亚馥 赵寿元 莱翼坟 戴灼华 编写 按（姓氏笔划排序） 高等教育出版社 内容提要 21世纪的遗传学将是生命科学中发展最为迅速的学科之┅为适应面向21世纪的教学需求本书在吸收 了国外优秀遗传学教材的特点和介绍现代遗传学最新成就的基础上，既亲统而透彻地分析了遗傳学的基本原 理又较好地反映了2“世纪””年代以来遗传学的发多历程和遗传学研究的新成就。 全书共分20章运用分析和推论的方法阐述遗传学原理。内容包括孟德尔式遗传分析连锁遗传分析与染 色体作图，基因精细结构的遗传分析病毒的遗传分析，细菌的遗传分析真核生物的遗传分析，遗传重组原核 生物基因的表达及其调控，真核生物基因的表达及其调控遗传与发育，核外遗传遗传物质的妀变(一)染色体 畸变，遗传物质的改变(二)基因突变群体遗传与进化，数量性状的遗传分析基因工程导论，遗传学与人类 健康 本书可作為综合性大学、理工大学、师范院校生物学本科生的遗传学基础课教材，也可作为教师、研究生和 科技工作者的参考书 图书在版编 目 C【IP)數据 遗传学/王亚馥，戴灼华主编.一北京:高等教育出版 社3重印) ISBN7一04一007261一0 工.遗… II.①王… ②戴… i.遗传学一概论 IV.Q3 中国版本图书馆CIP数据核字 (1999)第02828号 遗 传 學 王亚馥 戴灼华 主编 出版发行 高等教育出版社 叻‘书热线 010一 杜 址 北京市东城区沙滩后街55号 免费咨询 800一810一0598 邮政编码 100009 网 址 传 真 010一 .en 经 销 新华书店丠京发行所 印 刷 北京地质印刷厂 开 本 787x 版 次 1999年6月第1版 印 张 38 印 次 2003年4月第6次印刷 字 数 930000 定 价 29.60元 凡购买高等教育出版社图书，如有缺页、倒页、脱页等 质盘间题请在所购图书销售部门联系调换。 版 权 月斤有 si 权 r4究 .舅旨 月U .二刁 当今是生命科学蓬勃发展的时代而遗传学是其中发展最为迅速的前沿学科之一。随着新 技术、新方法的层出不穷遗传学的研究范畴更是大幅度拓宽，研究内容不断地深化为适应学 科发展，培养噺世纪人才面向新世纪课程体系和教学内容改革的需要，编写新的遗传学教材势 在必行 我们是毕生从事遗传学教学和相关学科研究的敎师。’根据多年教学实践和资料的积累并 在分析研究了近年来国内外一些优秀遗传学教材的基础上，我们分工协作编写了本书希望能对 我国遗传学的教材建设和教学质量、教学水平的提高尽绵薄之力。 作为基础课教材我们在编写过程中十分重视保持本学科 自身的完整性与系统性，使读者掌 握遗传学的基本规律、基本理论、基本概念和基本研究方法 为适应21世纪学科发展的需要，本教材内容的起点较高鉴于 目前中学生物学和大学某些 相关课程中对经典遗传学内容已有介绍，因而本教材压缩了对经典遗传学的某些论述以较大篇 幅扩充了现代遗传学内容，介绍本学科的最新成果和发展前沿使读者了解和掌握国际上遗传学 发展的现状和趋势。 在本书的编写过程中我們始终把培养学生的遗传分析能力放在首位:从遗传现象到分子基 础、基因的精细结构与功能;从原核生物到真核生物的遗传分析等。全书对遺传物质的本质、遗 传物质的传递、遗传物质的变异以及遗传信息的表达与调控进行了较为深入和集中的讨论以期