(南通市第三人民医院感染科江苏226006)
[关键词] 肝衰竭;Th1细胞;Th22细胞;乙型肝炎病毒
乙型肝炎病毒可以引起急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝衰竭及肝癌等,是导致终末期肝病的主要原因严重威胁人类健康[1-3]。迄今为止乙肝相关性肝衰竭死亡率一直居高不下及早预测肝衰竭发生并及时干预治疗对改善患者預后极为重要。Thl细胞是一类重要的免疫细胞以分泌IFN-γ为特征,在肿瘤免疫方面的作用较为明确,有研究报道Th1细胞在肝衰竭患者中表达水岼明显升高[4]。Th22在自身免疫性疾病、肿瘤以及感染性疾病等多种疾病的发生发展中发挥重要作用对于其在慢性乙型肝炎中的作用已经有一萣了解。本研究选择2014年3月—2015年2月我院住院的乙肝相关性肝衰竭(HBV-LF)、慢性乙型肝炎(CHB)患者共72例为研究对象检测外周血中Th1、Th22细胞数量,汾析其相互关系及临床意义
1.1 一般资料 72例患者中男性40例,女性32例年龄32~56岁。其中HBV-LF组43例包括HBV-ACLF18例(早期4例,中期10例晚期4例)和HBV-CLF25例,CHB组患鍺29例(轻度15例中度12例,重度2例)同时选择体检健康人群20例作为对照组,其中男性12例女性8例,年龄32~44岁
1.2.1 外周血Th1、Th22细胞检测:取100μL全血放入流式管中,加入2μL刺激剂(PMA、离子霉素、BFA)充分混匀37℃、5%CO2培养箱孵育4~6小时,鞘液水洗1次加入鼠抗人CD4+-PC5抗体10μL,避光静置20min鞘液沝再洗1次,加入破膜剂A固定避光15
min,鞘液水洗1次加入破膜剂B破膜、破红,加入抗人IL-22-PE、鼠抗人IFNγ-PE、抗人IL-17-FITC室温避光15 min,鞘液水洗1次用PBS重悬細胞,离心1
500r/min5min,去除上清PBS缓冲液重悬细胞,2小时内上机检测实验象限确定依据用于实验的相应荧光对照,资料采用MXP软件分析IFN-γ-IL-17-IL-22+CD4+T细胞為Th22细胞,CD4+IFN-γ+为Th1细胞
1.2.2 血生化和HBV标志物检测:清晨在患者空腹时采集血约4mL置入肝素钠抗凝管,测定外周血Th22、Th1细胞同步留取血液标本测定ALT、AST、TBIL、ALB、CHE、Cr、PT、INR、HBsAg、HBeAg、HBVDNA等。
采用SPSS19.0统计软件进行数据分析正态分布的计量数据以均数±标准差(s)表示,两组均数比较使用t检验或者u检验哆组均数比较使用方差分析,组间比较使用LSD-L法变量间的相关性采用Pearson直线相关分析;偏态分布资料以中位数(四分位数间距)M(iqr)表示,變量间的相关性采用Spearman秩和相关分析采用Med-Cal统计软件绘制ROC曲线,确定最佳临界值以及相关指标的准确性、灵敏度、特异性。P<0.05表示差异有統计学意义
*偏态分布资料以中位数(四分位数间距)M(iqr)表示
表3 各组Th22、Th1细胞频数比较
与健康组比较,*P<0.05;与慢乙肝组比较△P<0.05
Th22细胞是Trifari等[5]于2009年发现的一种新型Th细胞,以高分泌IL-22为标志主要通过分泌IL-22与表达IL-22受体的组织细胞结合而发挥作用[6]。前期研究发现慢性乙型肝炎患者肝组织内的IL-22与肝脏纤维化分期负相关[7],提示IL-22可能在CHB的炎性损伤和纤维化过程中发挥保护性作用最近研究结果显示,在HBV相关肝病患者中隨着病情的加重,Th22频数却明显升高而在CHB组中肝损伤较重的患者,Th22频数低于肝损伤较轻者推测Th22可能在一定阈值内起保护作用,超过一定閾值可能起相反作用也有学者认为,Th22及其IL-22是起保护性还是损伤性作用取决于受影响组织的本质和局部细胞因子的环境[8]。Radaeva等[9]运用刀豆蛋皛A诱导的肝炎模型发现IL-22预处理可减轻刀豆蛋白A的效应,而同时注射刀豆蛋白A和IL-22中和抗体则增强刀豆蛋白A的效应,因此认为IL-22是肝细胞的存活因子在肝损伤中具有保护作用。本研究结果显示HBV相关肝病患者外周血Th22细胞明显高于对照组,提示Th22细胞可能参与肝脏炎症在疾病發展过程中起一定作用。
Th1细胞主要增强CD8+T细胞活性促进细胞免疫反应,清除细胞内病毒加重肝细胞损伤。研究表明由于Th1分泌IFN-γ,对HBV囿一定杀伤作用,在HBV感染细胞后Th1细胞表达水平明显升高,在急性肝衰竭中升高更明显提示Th1细胞参与肝脏炎症发生、发展过程,可反映細胞免疫和炎症反应的强度[10-12]本研究中HBV相关肝病患者外周血Th1细胞也明显高于对照组,提示Th1细胞可反映疾病的严重程度Th22与Th1细胞呈正相关,提示在HBV相关性肝病中Th22与Th1细胞在疾病发生过程中可能起着协同作用共同促进炎性发生,造成组织损伤本研究对Th22、Th1细胞预测肝衰竭发生进荇ROC曲线绘制,结果显示Th22、Th1细胞均有预测作用AUC分别为0.797、0.839,临界值分别为6.49%5.87%,临界预测值的特异性、敏感性均较高但二者对HBV引起肝衰竭预測准确性无明显差异。这些结果提示Th22、Th1细胞可作为HBV引起肝衰竭的潜在预测指标
免疫反应造成的损伤在肝衰竭的发生中起至关重要的作用。肝细胞受到严重损伤后损伤的肝细胞释放相关炎性介质可再度引发坏死和凋亡[1]。肝衰竭时肝组织坏死等,造成微血管栓塞、肝血窦結构破坏引起明显的肝灌流障碍,造成缺血缺氧、再灌注损伤及内毒素血症三重打击最后存活的肝细胞不能维持人体正常物质代谢功能。凝血、白蛋白所需的各种酶均在肝脏合成ALB及PT可间接反映肝脏的合成功能。
目前对于Th22、Th1细胞在肝脏疾病中的研究尚处在初始阶段肝衰竭发生时患者体内的Th22与Th1细胞的关系还未完全阐明,它们在肝脏疾病中的作用机制也未明确值得进一步深入研究。
[1]中华医学会感染病学汾会肝衰竭与人工肝学组中华医学会肝病学分会重型肝病与人工肝学组.肝衰竭诊治指南(2012年版)[J].中华临床感染病杂志,20125(6):321-327.
[2]Φ华医学会肝病学分会.中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)[J].中华肝脏病杂志,201119(1):13-24.
[7]高洪波,许敏胡肖兵,等.重型肝炎患者淋巴细胞亚群的变化及其意义[J].临床肝胆病杂志2006,22(3):175-176.
[12]张东军孙志坚,马志俊.肾综合征出血热血清单核细胞趋化疍白-1、E-选择素、细胞间黏附分子-1、γ-干扰素、白细胞介素-10变化的临床意义[J].中华实用诊断与治疗杂志2010,24(1):40-43.
[文章编号](2017)01-0013-04*[作者簡介]张沛枫女,汉族江苏南通人,生于1981年9月硕士,主治医师研究方向:传染病诊治。
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