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设计了3条引物，请大家帮我看看是否可用，两个哪个好一些呢？谢谢了！
据说TM值56多的话到时候引物合成回来的TM要40多，可以用吗？
然后有错配的2对引物，错配产物都为0，影响不大把。
木有人啊… LZ并没有把问题说的太明白，对于引物设计有许多的原则问题（比如长度，GC含量，Tm值。。。），其中最重要的是Tm值，当然计算Tm值有多种方法，其中较为常用的有Tm=4×（G+C）+2×（A+T）-5，其中A,T,G,C均为引物能与模板配对的数目，结合一些原则就可以设定理想的引物，对于引物设计原则希望楼主可以去查找一下，细读揣摩。 Tm, GC这些只要不是太离谱,统统都不重要,重要的是 引物序列是否与原序列完全相符, 没有错误碱基. 第一对第三对看起来不错. 还有看你的产物, 一个400bp,一个200.哪个更符合你的要求? : Originally posted by huxx at
Tm, GC这些只要不是太离谱,统统都不重要,重要的是 引物序列是否与原序列完全相符, 没有错误碱基. 第一对第三对看起来不错. 还有看你的产物, 一个400bp,一个200.哪个更符合你的要求? 此言差矣，引物序列和原序列相符这个毋庸置疑，相信primer设计的不会有错配，那怕是自己手写也不会出错的，最为关键的是Tm，还有保证上下游引物Tm不能相差太大（3-5℃以内）。 第三个引物是做好的，
理由：1、自由能变最小。其大于零会产生2聚体
& && &2、在5端有个gc碱基，比较稳定。
&&其他的大家也说了。 设计的质量都不高，建议楼主修改下错配碱基
另外，评价引物好坏的方法不是看这几张图，建议楼主用primer5 设计引物，用oligo7 评价引物，最后去NCBI进行 primer blast : Originally posted by 孙启亮 at
设计的质量都不高，建议楼主修改下错配碱基
另外，评价引物好坏的方法不是看这几张图，建议楼主用primer5 设计引物，用oligo7 评价引物，最后去NCBI进行 primer blast 特异性很重要 看起来还可以吧，去blast一下，主要是你的pcr的方法，你需要的片段长度～仅供参考～ 不负责任的说法是，实践是检验真理的唯一标准。我设计流感NP基因的引物，通过primer看不存在引物二聚体，但是扩增的时候就是出来了。后来从文献上找了一对，在primer 5里看了看，除了发夹结构没有，其他的我觉得都挺玄乎的。结果人家的特异性就是好。大学里有个老师设计引物就是“掐头去尾”，我没看过他的结果咋样，但是他说大部分情况下是没问题的。与其花太多时间纠结，比如都合成之后试一试。一对引物才几十块钱 : Originally posted by 考研生涯 at
此言差矣，引物序列和原序列相符这个毋庸置疑，相信primer设计的不会有错配，那怕是自己手写也不会出错的，最为关键的是Tm，还有保证上下游引物Tm不能相差太大（3-5℃以内）。... 我说的错配是指实际上的错配,如你网上找的序列,你根据这个来设计引物,但这个序列和实际你需要扩增的基因组,有可能会有些差异.&&另外Tm, 我曾试过两条引物相差10度, 可以扩出来.&&还有Primer5的评分,&&什么100的, 50的, 只要模版质量好, 都可以扩出来.& & 也许我扩的东西太简单. 这个PCR要求并不是想象的那么高,&&关键模版质量高的话,&&引物基本没有错配. 摸摸条件, 一般都能扩的出. 楼上们说的都很专业，你可以先设计，找打分最高的，然后拿到Oligo里面急性评价，如果实在找不到合适的方法去筛选这三个，那就三个都合成出来，然后用PCR来验证，最有效的方法，但比较耗钱麻烦大家帮我看下这个两室两厅户型咋样？能入手吗？
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本帖最后由 布娃娃 于
14:10 编辑
大家觉得这个户型如何？原标题：大家帮我看看这个户型如何？
两室两厅一厨一卫.jpg (55.8 KB, 下载次数: 0)
大家帮我看看这个户型如何？
14:04 上传
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暗卫，暗厨！
从整体来说如何呢？风水怎样？&
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你好，如需了解买房相关信息，可加小编微信：！会有人帮助你买到合适的房子
嗯，已经报名了&
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你所不及 发表于
从整体来说如何呢？风水怎样？
风水………这个看不懂！
你要知道风水不仅要看户型的！
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法苑小区的房子
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厨房与卫生间对面，风水上说是不好。
另外，两个卧室都存在西晒问题，这个比较糟心，不太美吧
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文章很精彩！
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这种八九十平的 户型大概都是这个样子& &
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