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【讨论】为什么偶联KLH的多肽制备抗体，三次免疫后没有效价
【讨论】为什么偶联KLH的多肽制备抗体，三次免疫后没有效价
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这个帖子发布于3年零236天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我们设计了3条多肽偶联KLH，然后用偶联BSA的多肽去检测抗体效价，其中一条多肽是文章发表过的。至今免疫了三次了，用全蛋白免疫的抗体效价可以达到1:50万之高。但是为什么多肽的效价一点都没有。而且发过文章的也没有起。大家能帮忙分析一下原因么？会不会是多肽合成或者偶联上的问题啊？应该不是免疫方法的问题吧，不然蛋白为什么起效价了呢？真是奇怪啊。谢谢啦。
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多肽的问题可能性大些，一个是文章 的权威性，还有就是多肽合成的质量如何？应该拿出具体的多肽组成让高手帮你看看
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咋看多肽合成的质量啊？就一个质谱图，偶联也没有什么证明，是在北京的赛百盛做的。都免疫5次了，都没效果。气死人了。
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没有免疫出来，一般的情况是你免疫这部出了问题，检测的话你直接用裸露的多肽检测就可以了。免疫出了问题有很多种，比如，没有偶联上，免疫剂量，乳化等等，还有你每次免疫的时间间隔是多少？
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谢谢qjy_134。我们同时还免疫了全蛋白的，方法都一样。效价很高有1:50万。我现在唯一想知道的就是偶联上没有。但不知道有什么方法可以证明偶联上没有。我们用裸露多肽检测过，但是因为多肽很小，我们试过很多条件，一是可能没有连到板子上，我不知道大家有没有遇到过这种。就是包被不上。或者就是没有效价。总之也是值很低，就是跟阴性一样。所以我觉得也不能说明问题。
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confidebb wrote:我们设计了3条多肽偶联KLH，然后用偶联BSA的多肽去检测抗体效价，其中一条多肽是文章发表过的。至今免疫了三次了，用全蛋白免疫的抗体效价可以达到1:50万之高。但是为什么多肽的效价一点都没有。而且发过文章的也没有起。大家能帮忙分析一下原因么？会不会是多肽合成或者偶联上的问题啊？应该不是免疫方法的问题吧，不然蛋白为什么起效价了呢？真是奇怪啊。谢谢啦。BSA 偶联的泡个SDS电泳看看~~~同时跑一个BSA，对比一下，一般偶联上的会有一些弥散的
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KLH可溶性极差的，所以一般不用于包被。你可以将一部分多肽偶联-BSA来包被ELISA板哈
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无需乳化的免疫佐剂，挺好用的，可以转换一下实验条件，看有没有新的收获。
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【求助】关于多肽和蛋白偶联
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这个帖子发布于7年零204天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
大家好！我现在有一个36aa的多肽分子，N端是Leu，C端是His，想偶联一个大分子蛋白。用于NC膜点样，请问用哪种载体蛋白和偶联方法较好？大概多少偶联比呢？请大家帮帮忙！
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载体蛋白最常用的是BSA,其次还有KLH及OVA.偶联方法可以考虑一下碳化二亚胺法以及戊二醛法。戊二醛法多肽与蛋白的偶联比为20:1-40;1.
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载体蛋白最常用的是BSA,其次还有KLH及OVA.偶联方法可以考虑一下碳化二亚胺法以及戊二醛法。戊二醛法多肽与蛋白的偶联比为20:1-40;1.
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多肽与蛋白的偶联具体偶联那一种载体,你要考虑偶联载体后是否与你的检测相产生抗体的载体相同,如果相同就容易产生载体交叉反应
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多谢大家帮忙！请继续赐教！
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只是用于点在NC膜上的话不一定要偶联再点，我以前曾做过点在PVDF膜上，最短的只有十几个AA，你的36aa，分子量也不算小了，试试看吧
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只是用于点在NC膜上的话不一定要偶联再点，我以前曾做过点在PVDF膜上，最短的只有十几个AA，你的36aa，分子量也不算小了，试试看吧
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谢谢dalanlong的建议。我会试试。不过还有一个问题，我这个36aa的多肽是个小分子抗原，原材料价格有些贵，而且是100ug分装的。如果偶联的话，请问按照你们的经验，大概需要多少的量？
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