先连接T载体是为了提高转化效率┅般来说市面上出售的T载体都进行了优化容易连接片段(也就是效率较高),因此构建表达载体时有时会先连接T载体同时T载体的测序引物比较明确(商业化的缘故),因此测序也方便一些更重要的是,T载体往往设计了蓝蓝白斑筛选筛选的功能插入片段的载体会呈现皛色,这样也容易区分验证不用每个单菌落都拿去做colony PCR或提质粒酶切验证。当然也不是绝对的我们实验室就经常直接把片段酶切后连接表达载体,不经过T载体这一步其实影响并不大。如果你的情况比较特殊(比如片段较大或是对应的表达载体拷贝数较低等),可以考慮连接T载体不然的话不是非常必要。
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